NF-KB信号通路资料.pptVIP

（3）在多发性骨髓瘤 (MM)中也有 NF -κB的激活 ,通过 PS - 341对 NF -κB的抑制和 NF -κB的抑制剂 InBa的表达 ,它使MM细胞对传统的化疗药物如 (阿霉素 )更敏感。 （4）冬凌草素甲 ,一种天然的二萜化合物，通过抑制 NF-κB和下调 Bcr- 2家族蛋白诱导恶性淋巴细胞的生长抑制 ,促使细胞凋亡。 （5）NF -κB是对 ATL和 MM等淋巴细胞恶 性肿瘤靶向治疗的一个靶点。 （三） NF –κB及其他转录因子研究常用的一项方法-EMSA 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA) : （EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异）， 和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。 谢谢！ IKK激活途径可能是一个反馈调节的重要机制。接受刺激后，NEMO与IKK的结合区域被磷酸化，磷酸化位点为丝氨酸68。这个磷酸化可诱导NEMO二聚体的分离，和阻碍IKK与NEMO之间的相互作用，从而终止信号通路。这种构象的变化可被伴侣分子HSP-90或IKK复合物的磷酸化酶所识别，通过HSP-90或者NEMO在丝氨酸68的脱磷酸化的作用，可以使IKK复合物恢复活性。 根据以上的研究发现，IKK的激活模型被提出。（见下页） IKK激活的反馈调节 IKK的激活模型 ☆1.在静息状态下，(NEMO2IKKα1IKKβ1)复合物中，IKKs通过与NEMO相互作用而被抑制。 ☆ 2.在有刺激物的情况下，NEMO结合一个RIP蛋白（NEMO泛素化），使IKK的蛋白激酶区域暴露，诱导T环丝氨酸残基的反式自磷酸化或者由IKK-K磷酸化T环丝氨酸残基。 ☆3.被激活的IKK可磷酸化下游的酶作用底物（如IκB s），从而激活NF-κB信号通路。 被激活的IKK还可磷酸化IKKβ的丝氨酸740和NEMO的丝氨酸68,使得NEMO二聚体与IKK的分离,阻止激酶的反复激活。 ☆4. Cdc37/HSP-90（伴侣分子）和 PP2A/PP2Cβ（磷酸化酶）可以介导IKK复合物的重组。 小结 ①在NF-κB信号通路中，寡聚化的出现是一个共有的主题。 ☆ TRAF蛋白的寡聚化使其可以顺利向NF-κB信号通路下游传递信号。 ☆ RIP蛋白的寡聚化在NF-κB经典信号通路中是必需的。其与NEMO相互作用诱导IKK复合物的积聚。 ☆ NEMO的寡聚化/泛素化在激活NF-κB信号通路中也是很重要的。 同时，NEMO的泛素化在DNA损伤反应中也很重要。 ② 一个复杂的NF-κB信号通路中，对于IKK的激活，是需要上游信号元件的寡聚化和泛素化。 但是，在非经典信号通路中，RIP介导的NEMO的寡聚化不会发生，IKKα是通过NIKS直接介导T环磷酸化所激活的。IKKα对于NEMO的低亲和力也促使NIK进入IKKα的T环发挥作用，而不是IKKβ。 ③ IKK的激活是一个短暂事件，其从属于反馈调节机制。 ☆ 多数的反馈调节机制作用于上游信号元件，其中作用最显著的是脱泛素化酶A20和CYLD。 ☆ IKK的C-末端NBD的磷酸化也是一种重要的反馈调节环的元件。 ☆ 蛋白磷酸酶2A（PP2A），也可以通过转移T环磷酸化来阻碍IKK的激活。 3.IKK的酶作用底物 ★ 自由的IκB家族成员： ① IKKα、IKKβ可磷酸化IκBα丝氨酸32、36和 IκBβ的丝氨酸19、23。其中，作为IKK的酶作用底物， IκBα要优于IκBβ。大多数情况下，IκBβ降解速度比IκBα慢。 ② IKKα可以磷酸化P100的丝氨酸672。