高效毛细管电泳资料.ppt

1959年，Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶作为支持电解质，创造了聚丙烯酰胺凝胶电泳，极大地提高了区带电泳的分辨率。 20世纪60年代，Svernsson、Vesterberg、Martin、Everaerts、Konst-antinov、Oshurkova和Ornstein等的工作，促进了等速电泳的产生和发展 经典电泳分析 高效毛细管电泳 HPCE 1.2 HPCE的特点 4）、毛细管等电聚焦 （capillary isoelectric focusing，CIEF） 5）、毛细管等速电泳 （capillary isotachophoresis ，CITP） 6）、毛细管电色谱 （capillary electrochromatography ，CEC） 2 高效毛细管电泳的基本理论 2.1 基本原理 2.2 电渗现象与电渗流 2.HPCE中的电渗现象与电渗流 3.HPCE中电渗流的大小与方向 4. HPCE中电渗流的流型 5. HPCE中电渗流的作用 2.3 HPCE中影响电渗流的因素 3. 电解质溶液性质的影响 4. 温度的影响 5. 添加剂的影响 2.4 淌度 mobility 2.5 HPCE中的参数与关系式 3.分离度 2.6 影响分离效率的因素——区带展宽 3.焦耳热与温度梯度的影响 4.溶质与管壁间的相互作用 5.其他影响因素 5.其他影响因素 3.2 仪器流程与主要部件 1.高压电源 3.缓冲液池 定性分析——影响迁移时间重现性的因素 3.3 毛细管电泳的进样方式 5 毛细管电泳应用实例与进展 水中无机阴离子及有机酸的测定 食品防腐剂的测定 食品中有机酸的测定 食品中氨基酸的测定 乳清中马尿酸和乳清酸的测定 单糖测定 单糖测定 高效毛细管电泳仪 型号：NANOFOR-1 产地：欧洲 　 NANOFOR-1型-?紫外分光光度检测器 UV，波长200?~?700?nm 高效毛细管电泳仪 型号：NANOFOR-2 产地：欧洲 NANOFOR-2型-?激光诱导荧光检测器 LIF，波长473nm 、 Beckman 毛细管电泳仪 型号：P/ACE MDQ （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：0.1%； （5）电源极性易转换。 （1）材料：要求具有化学、电学惰性，紫外-可见光透光性，柔韧性，高强度，价廉。常用材料为熔融石英，外层涂聚酰亚胺；新材料有聚四氟乙烯。 （2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度 1m。 2. 毛细管柱 4. 检测器 要求：具有极高灵敏度，可柱端检测； 检测器、数据采集与计算机数据处理一体化。 化学惰性，机械稳定性好。 各种类型检测器性能列表 * * 定量分析要求峰面积重现。一般条件控制好的话，可以获得好于2％的RSD。影响峰面积的主要因素有温度的变化、样品的吸咐、小段样品的精确进样和低信噪比下的信号积分。许多因素可以直接由用户决定，只有一少部分完全由仪器决定。和迁移时间重现性一样，使用内标法往往是很有用的。 定量分析 峰面积的定量分析中溶质具有不同的迁移速度。这不同于在色谱技术中溶质在流动相中以同样的速度前移。对迁移速度必须进行校正，因为在检测区域停留的时间不同会影响峰面积。迁移慢的溶质在检测窗口停留的时间要比迁移快的长一些，所以峰面积大。 定量分析 ·使用流体力学进样 ·样品基体的变化 电迁移进样 ·分离电压渐升 ·缓冲溶液受热膨胀，样品溅出 高压的突然增加 ·优化积分参数；增大样品浓度；使用峰高 ·积分错误 低信噪比 ·改变缓冲溶液的pH；增加缓冲溶液的浓度；使用添加剂 ·峰形畸变 ·没有样品流出 样品在毛细管壁上的吸附 ·不能消除，但可以定量 ·额外的进样 将毛细管浸在样品中引起的零进样 ·毛细管端口要平正光滑；除去毛细管端口的聚酰亚胺；进样之后将毛细管浸入缓冲溶液或水中 ·额外的进样 样品粘带 ·增大进样时间 ·系统的响应时间随进样时间变化 仪器的限制 ·盖紧管盖或冷却样品 ·增大样品浓度 样品蒸发 ·毛细管恒温 ·改变粘度和进样量 温度的变化 解决方法 原因及影响 影响因素 影响峰面积重现性的因素 进样量：毛细管长度的1%-2%；纳升级、非常小； （1）进样端加压 1. 流体力学进样方式 （2）出口端抽真空 （3）虹吸进样，即进样端高出出口端 毛细管一端插入样品瓶，加电压； 2. 电动进样方式 进样不均：电歧视现象，淌度大的离子比淌度小的进样量大； 离子丢失：淌度大且与电渗流方向相反的离子可能进不去； 特别适合黏度大的试样。 3. 扩散进样 试样通过扩散作用进入