分子检测技术在肿瘤中的应用.pptVIP

肿瘤靶向治疗（Target therapy of cancer） 依据已知肿瘤发生的异常分子和基因，设计和研发针对这些特定的分子和靶点药物，选择性杀伤肿瘤细胞的治疗方法； 靶向治疗的前提就是明确肿瘤的特异靶基因变异类存在与否和变异类型； 个体化治疗的雏形。 荧光原位杂交（ Fluorescence in situ hybridization，FISH ）技术 简介 FISH = Fluorescence In Situ Hybridization 利用荧光标记的DNA探针检测组织或细胞内与其互补的DNA片段 应用：遗传病诊断 血液肿瘤 实体瘤 样本：羊水、绒毛、流产组织、外周血、骨髓、体液及各种肿瘤组织等 检测技术特点 不同类型的淋巴瘤染色体易位类型不同 优点 适用于形态学上难以诊断且IHC结果不理想的标本； 适用于细胞数量少，形态不典型的活检及穿刺组织。 必须结合组织形态学和免疫组化结果作最后诊断！！！ 1.RNA酶A切割(RnaseAcleavage) 2.变性梯度凝胶电泳(DGGE) 3. 杂合双链分析法(HA) 4. 化学切割错配(CCM) 5.碳化二亚胺检测(Carbodiimide,CDI) 6.酶促切割错配(Enzyme Mismatch Cleavage, EMC) 7.单链构象多态性 (Single-Strand Conformation) 8.切割片段长度多态性 9.DNA测序(Sequencing) 10.双脱氧指纹图谱法(Dideoxy Finger-printing, ddF) 11.错配接合蛋白检测 12.蛋白截短测试（protein truncation test） 肺癌组织EGFR基因扩增和突变检测及其临床意义 研究背景 研究显示吉非替尼对部分晚期NSCLC患者的治疗效果非常显著。 存在EGFR基因突变的患者更有可能对吉非替尼的治疗敏感。 存在EGFR基因扩增的肺癌、肠癌病人对分子靶点药物更为敏感。 检测大肠癌有无EGFR过度表达，只要1%的癌细胞的胞膜强阳性染色即判断为3+，可作为应用西妥昔单抗的指征。 EGFR基因变异检测 FISH检测EGFR基因扩增 标本类型：石蜡包埋组织（手术、活检、穿刺） 冰冻组织 胸、腹水沉渣细胞 探针类型：GLP EGFR / CSP7 定量PCR检测EGFR基因突变分型 突变类型： 19 exon （2235-2249位点）15bp缺失突变 19 exon （2240-2257位点）18bp缺失突变 19 exon （2240-2251位点）12bp缺失突变 21 exon 2573位点TG碱基置换突变 21 exon 2582位点TG碱基置换突变 FQ-PCR 检测15bp缺失阳性病例结果 15bp缺失突变型DNA的测序图 目前K-RAS突变检测常用技术 方法 直接测序 焦磷酸测序 高分辨率熔解曲线 PCR-RFLP 芯片 杂交 Real-Time PCR K-ras突变检测基本流程图 直接测序(Direct Sequencing) PCR扩增后产物直接测序 双脱氧核苷酸链终止法(Sanger法) DNA 片段是荧光标记的，这些片段经过平板胶电泳或毛细管电泳得到分离，荧光分子被激发而发光，发出的光信号被检测系统检测 K-ras突变检测结果 疗效预测标志物与预后判断标志物 疗效预测标志物： 能够预测某种特定治疗方式疗效的标记物 KRAS基因突变导致肿瘤对EGFR抑制剂抵抗 预后判断标志物： 在不考虑治疗因素的情况下能够判断患者结局的标记物 18号染色体长臂（18q）缺失 某些分子标志物兼具两种作用 胸腺嘧啶合成酶（Thymidylate synthase） EGFR 作为预后因子的价值 EGFR expression correlates with poor prognosis Cetuxamab(西妥昔单抗) 人源化嵌合单抗（ IgG1 ） 靶向作用于表皮生长因子受体（EGFR） 阻断EGF 和TGFα与EGFR 的结合，抑制酪氨酸激酶活性和其后的肿瘤生长 200４年获得FDA审批资格治疗结直肠癌 Panitumumab（帕尼单抗） 完全人源化单克隆抗体(IgG2) 靶向作用于表皮生长因子受体（EGFR） 2005年7月获得FDA快速