分子生物学转录后加工.pptVIP

第三章 生物信息的传递（上） ——从DNA到RNA 第一节 tRNA和rRNA的加工 一. 原核的 tRNA和 rRNA的加工 参与蛋白质合成的tRNA和rRNA都不是最初的转录产物 (1) 它们的5`端都是单磷酸，而原始的转录产物5`端应是三磷酸； (2) 分子比初始转录物小； (3) tRNA含有特殊的碱基，这些碱基只有通过一些化学修饰才可以得到。 (一) tRNA的加工 tRNA一般首先合成一条前体链，其一侧或两侧具有额外组分。额外的序列被核酸内切酶和核酸外切酶作用共同去除。 大多数tRNA的一个共同特点是它们在3`端有一个三核苷酸(总是CCA)，它们不是由基因组编码的，而是在tRNA加工过程中被添加上去的。 三种tRNA前体分子 (一) tRNA的加工 tRNA的加工分成3个阶段 (1) “斩头”，形成5`末端； (2)去尾，形成3`-OH末端。缺-CCA的tRNA要用tRNA核酸转移酶加-CCA。 (3)修饰：通过甲基化酶，硫醇酶，假尿嘧啶核苷化酶等进行修饰，如氨基酸臂的4-硫尿嘧啶，D臂的二氢尿嘧啶，TψC臂的假尿嘧啶（ψ）。 （二）原核生物rRNA的加工 在E.coli中rRNA有7个转录单位分散于基因组中，名为rrnA-G。 rRNA序列是保守的,每个转录单位都含有16S、23S、5S RNA， 4个rrn基因座包含一条在16S RNA和23rRNA之间的tRNA基因，其他的包含两条tRNA基因。另外的tRNA基因可能在或不在5S序列和3`端之间。 每个转录单位中含有等比例的16S、23S、5S RNA，因为它们仅存在于核糖体中且是等比例的，因此串联转录单位保障了它们的等量关系。 原核生物rRNA的加工 RNase Ⅲ由2个亚基组成，起内切酶的作用。它可能识别一级结构和二级结构相结合的某种特征。 在30S前体RNA中，P16S和P23S各自的5`和3`都能互补配对，形成含有1600nt和2900nt的茎环，RNase Ⅲ在二者的茎上交错切割（而不在单链泡上切开）产生了P16S，P23S和P5S rRNA前体。再进一步由外切酶进行修正，切除多余的部分形成各种成熟的rRNA分子。 二、真核的tRNA和rRNA的加工 真核tRNA的基因和原核不同： (1)真核的前体分子tRNA是单顺反子，但成簇排列，基因间有间隔区； (2)真核tRNA基因一般都比原核tRNA基因多得多，如酵母约有400个tRNA基因； (3) 5`端单磷酸核苷酸，表明已被加工过； (4) tRNA的前体分子中含有内含子。 真核tRNA内含子的特点： 在酵母272条左右的tRNA基因中，有59条为断裂基因。每条只含有一个内含子。 ① 位置相同，都在反密码子环的下游相距一个核苷酸； ② 不同tRNA的内含子长度（14～60bp）和序列各异； ③ 外显子和内含子交界处无保守序列； ④ 内含子和反密码子配对形成茎环 ⑤ 内含子的多数突变不影响正常剪接 有何意义？ 体外tRNA剪接反应需要ATP。反应包括需要ATP和不需要ATP两种情况说明剪接反应的两个阶段是由不同的酶催化的。 第一步不需要ATP。由一种非典型的核酸内切酶切断磷酸二酯键。 第二步需要ATP，包括键的形成，是一个连接反应，由RNA 连接酶将断端连接，形成成熟的tRNA。 酵母的内切酶是一种异源四聚体蛋白质， Sen34亚基和Sen2亚基分别切割3`和5`剪接位点。 Sen54亚基通过“测量”成熟tRNA结构中某个点的距离来确定切割位点的位置。 尽管Sen15亚基的功能未知，但其在酵母中是必需的。 反密码子环的第一个碱基和3`剪接位点前的碱基之间的AI碱基配对对3`剪接位点的切割是必需的。 tRNA的连接 真核细胞中rRNA的加工途径 真核生物的18S，5.8S和28S rRNA基因是串联在一起形成一个转录本，初始转录本为45S前体（高等真核生物）或更小（低等真核生物如酵母中为35S） 5S RNA是由RNA聚合酶III从单独的基因转录的，这和原核的rRNA基因不同。 在真核的rRNA加工中rRNA和其他的真核基因也不同，它没有内含子，因此加工时，无需剪切内含子这一步。 酵母rRNA前体的剪切 rRNA加工需要小RNA 在rRNA加工和修饰中需要一组称为小核仁RNA (Small nucleolar RNAs，snoRNA)的小RNA 参与。它们与核仁(核中rRNA 基因的转录区)中大量存在的纤维蛋白相连接。 RNA前体切割时需要一些snoRNA，如在酵母和非洲爪蟾中的第一次切割就需要U3 snoRNA. snoRNA在切割中具体的作用机制还不清楚，可能是由于其与rRNA配对后形成可被核酸内切酶识别的二级结构。 rRNA的碱基修饰需要小RNA[1]