分子遗传学DNA复制.pptVIP

4.1 DNA复制的基本概念和复制方式 4.2 复制起点与方向 4.3 原核生物DNA复制的酶学 4.4 原核生物 DNA的复制 4.5 真核生物DNA的复制 4.6 线状 DNA的复制及避免5’末端短缩的模式 4.7 DNA复制的忠实性和真核生物复制过程中 的核小体结构 任何一种DNA聚合酶都不能起始合成一条新的DNA链，必须由一段引物提供3’-OH； 引物大多数为一段RNA(1-10Nt)； 在细菌中有两种合成RNA引物的酶－－RNA聚合酶和引发酶；前导链引物的合成受rifampin的强烈抑制， RNA聚合酶对rifampin敏感；后随链前体片段引物的合成不受rifampin的强烈抑制，引发酶对rifampin不敏感 切刻平移（nick translation） (4) 核酸内切酶的活性 当一段DNA带有5’－P的 不配对单链时，DNA PolⅠ可以作用在与此单链相连的两个配对碱基之间，切断磷酸二酯键 基因组为5386个Nt，单链环型DNA 利用寄主的基因产物进行复制 先合成正链的互补链(负链)，正链和负链形成双链环型DNA(复制型，RF)，然后以RF中的负链为模板合成正链 利用温度敏感突变体鉴定的dna基因 37℃能正常复制。42℃不能进行DNA复制，表现为或不能发动或不能延伸 Slow-stop mutants, S 缓慢停止突变体 即该突变体在非允许温度（42℃）下能完成正在进行的一轮复制，而不能开始下一轮复制 S突变体基因的产物必然是细胞从染色体复制原点起始一轮复制所必需的 Fast-stop mutants, F 迅速停止突变体 即该突变体在提高温度（42℃ ）时立即停止复制 F突变体基因的产物必然是DNA链的延长及冈崎片段的起始与连接所必需的 依赖于端粒的结构和能够识别或结合端粒的蛋白质和酶 端粒(telomere)：含有许多串联的短寡聚核苷酸，一条链若为TxGy，另一条链则为CyAx，x和y介于1～4之间 端粒酶(telomerase)：是一种核糖核蛋白，由RNA和蛋白质构成。RNA长约150Nt，约含1～5copies的CyAx重复序列，是合成端粒TxGy的模板 染色质结构的基本单位—核小体 由核心颗粒和连接区构成 核心颗粒包括由8个组蛋白分子（H2A，H2B，H3，H4各两个）构成的组蛋白核心和包绕在核心表面的DNA分子；包绕在组蛋白核心表面的DNA长140bp，环绕1?圈 连接区由DNA分子和H1组蛋白分子构成，长度不定 4.5 真核生物DNA的复制 4.5.1 DNA聚合酶 已发现4种DNA聚合酶：?,?,?,?(细胞核)；?(线粒体) 4.5.2 复制概况 a. 多个复制子（multiple replicon ），双向复制 b. 复制子相对较小(13-900kb), 复制速度较慢，大约 500~5000bp/min （3000bp/min） 冈崎片段100～200nt c. 复制终止通过复制 叉的相遇而终止 multiple replicons 例；果蝇 5000 replicons 平均 40Kb（酵母） 哺乳动物 平均100Kb 4.5.3 线粒体DNA的复制 线粒体DNA双股链浮力密度不同，分为轻链(C+A)和重链（G+T）； 置换式(Displacement form)又称为 D环(D-Loop) 复制 含有两个复制叉 4.6 线状 DNA的复制 及避免5’末端短缩的模式 （5’-end shortened ） 线状DNA的末端复制的问题 （1） 原核生物线状 DNA的复制－－ 5’末端短缩的解决模式 a. 从开始就采取环化的形式 －－－λ噬菌体 b. 象T7噬菌体一样采取连环分子的形式 利用自身线性DNA末端的重复序列－－ 通过末端互补形成连环分子 c. 最直接的办法－－－引入蛋白质直接从末端起始复制 如－－－腺病毒－2、phageΦ29、脊髓灰质炎病毒 d. 痘病病毒的末端由发夹结构连接 复制完成后错切连接 Watson J. D T7 phage Direct repeat in the