动物与家蚕的转基因技术.pptVIP

家残的繁殖理论与生物技术 转 基 因 技 术 转基因技术是将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的性状的可遗传的修饰，这一技术称之为转基因技术（Transgene technology）。人们常说的遗传工程、基因工程、遗传转化均为转基因的同义词。经转基因技术修饰的生物体在媒体上常被称为遗传修饰过的生物体（Genetically modified organism，简称GMO）。 Genetically Modified——转基因，简称GM。是指运用科学手段从某种生物中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，从而产生特定的具有变异遗传性状的物质。利用转基因技术可以改变动植物性状，培育新品种。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。 转基因动物就是基因组中含有外源基因的动物。它是按照预先的设计，通过细胞融合、细胞重组、遗传物质转移、染色体工程和基因工程技术将外源基因导入精子、卵细胞或受精卵，再以生殖工程技术，有可能育成转基因动物。通过生长素基因、多产基因、促卵素基因、高泌乳量基因、瘦肉型基因、角蛋白基因、抗寄生虫基因、抗病毒基因等基因转移，可能育成生长周期短，产仔、生蛋多和泌乳量高，转基因超级鼠比普通老鼠大约一倍。生产的肉类、皮毛品质与加工性能好，并具有抗病性，已在牛、羊、猪、鸡、鱼等家养动物中取得一定成果。 1.转基因绵羊 2.转基因鲤鱼 1．转基因动物的发展 1980年，J.W.Gordon等人首次报道用显微注射的方法向小鼠胚胎注射纯化的DNA，开辟了转基因动物研究的先河。 1982年，R.D.Palmiter等又报道用转移生长激素基因的方法，获得了7只转基因鼠，其中1只比一般小鼠大一倍，被称为巨鼠，引起极大的轰动。相继有转基因猪、鱼、兔和羊等问世。 国外转基因动物首创记录 3.转基因动物的技术路线 ⑴经典的技术路线 先从已交配的供体动物的输卵管中采取受精卵； 显微注射法向受精卵的雄性核导入人工构建的药物蛋白基因； 经外科手术把已导入外源基因的受精卵移入同步发情的受体母羊输卵管内； 让受精卵在“养母”体发育至分娩出生； 用分子生物学技术检测出生小羊是否已整合了导入的外源基因。 该法的缺点：实验周期长，注射的外源基因整合率低。 ⑵整合胚胎移植技术路线 该技术是对前种方法的改进。它利用了生殖技术中的体外受精技术，使精子和卵子在体外受精；然后找到一个最佳时机向体外受精的细胞显微注射药物蛋白基因。然后在体外对胚胎体进行整合的鉴定。从中挑选有目的基因整合的胚胎进行移植。采用经阴道的非手术胚胎移植法，减少了对受精卵的损伤。 ⑶核移植（克隆）技术路线 利用克隆技术进行转基因实验。即在进行克隆之前，先目的基因注射到将进行移植的核中，在按克隆技术进行操作。其成功率比经典技术路线高2.5倍。 ⑷整合卵受精技术路线 即在受精之前先将药物蛋白基因注射进入卵细胞，经检测已经完成整合后，再进行体外受精和胚胎移植。 A. 互补DNA cDNA 的克隆 通过提取组织中的mRNA, 用反转录酶合成cDNA，建立cDNA文库，再克隆目标蛋白的cDNA。由于cDNA缺乏内含子，影响基因导入后的表达效率。 B. DNA克隆 首先建立动物的DNA文库，再通过基因克隆技术获得编码目标蛋白的基因，这是获得目标基因最常用的方法。 目标基因被克隆以后需与表达载体相连结，形成一个独立表达的调控单元，再通过扩增和纯化，使DNA达到一定浓度就可用于基因导入受体。 基因导入的方法 A.反转录病毒感染法 retrovirus infection B.显微注射法 microinjection C.胚胎干细胞法 ES cell transfer method D.精子载体法 Sperm-mediated gene transfer E.生殖细胞转染法 Germ cell transfected F.细胞核移植法 Cell nuclear transfer A. 反转录病毒感染法 反转录病毒是双链RNＡ病毒，它侵染细胞后可通过自身的反转录酶以RNA为模板在寄主细胞染色体中反转录 成DNA。 在利用病毒载体转基因时，首先要对病毒基因组进行改造，将外基因插入到病毒基因组致病区，然后用此病毒感染胚胎细胞，即可对胚胎细胞进行遗传转化。如果在第一次卵裂之前外源DNA整合到胚胎基因组中，可获得转基因动物，在第一次卵裂之后整合，会产生嵌合体，其第二代可能出现转基因动物。 优点:方法简单，效率高，外源DNA在整合时不发生重排，单位点、单拷贝整合，并且不受胚胎发育阶段的限制。 缺点:携带外源基因的长度不超过15kb，载体病毒基因有潜在致病性，威胁受体动物的健康安全。 B.显微注射法