顺侧光调光显微镜的简易制作和放大实例.doc

透射式、落射式、暗场、荧光等不同类型的光学显微镜都有使用范围的限制。采用照相原理的顺侧光调光显微镜，即突破了使用范围的限制，又使有效放大倍率提高到6400倍以上，并在放大1000-1600倍时可以观察到其它显微镜在同样放大倍率时不能看到的有机物体和无机物体中的直径约为1微米的物质颗粒，以及在水的作用下金属体、细胞中的1微米颗粒的运动、闪光、化合和分解。放大6400倍时可以看到更小一级的物质颗粒——直径为0.1微米的颗粒的震动。论文关键词：亮度对比度,宽容度,照射角度,分辨率,暗场,微米颗粒
　　目前，光学显微镜根据阿贝极限理论主要强调了物镜的数值孔径和光线的波长对显微镜分辨率的影响，忽略了眼睛和照相设备对同时看到的光线强弱对比度的适应能力，导致大于显微镜分辨距离的构成物体的1微米颗粒不能被人们发现，这和我们白天很难看到天空的星星、晚上看到的月球会时圆时缺是同样的道理。因此构成物体的主体颗粒、细胞生理活动和运输分配的主体颗粒、分散于溶液中的物质颗粒——这些直径约为1微米的物质颗粒成了我们研究物质结构、物理和化学变化以及细胞生理的缺失和空白，物质的物态、色彩、形状、磁性、导电性的形成机制成了解不开的谜团。所以对光学显微镜进行深入研究，特别是将照相原理应用于显微镜是十分必要的。
　　1、 顺侧光调光显微镜的原理
　　顺侧光调光显微镜除成像原理外还主要涉及以下原理
　　（1） 照相原理。根据照相原理，透射式显微镜属于逆光，落射式显微镜属于顺光，普通暗场显微镜属于逆侧光，该显微镜的光源从标本的上侧方射入属于顺侧光。顺侧光使标本形成反射成像，它和普通暗场(逆侧光)显微镜相比，在提高标本的正表面亮度的同时暗场效果更好、标本更明亮。和落射式显微镜相比，它的照明光和成像光分属于两个光路，基本没有相互干扰。
　　（2） 采用相互对射的双光源，对射光能有效的消除微观颗粒因单向光源照射形成的虚光。
　　（3） 对比度和宽容度原理。照相设备和胶片除对光线亮度的强弱有一定的适应范围外，对同一副照片中的不同位置的光线亮度的强弱对比有更严格的要求，能够适应的亮度强弱对比的差异范围叫宽容度。黑白胶片能够反映的宽容度是1：128，彩色胶片的宽容度是1：64，数码照相和摄像机的宽容度是1：32。超过了以上的对比范围，亮度更低的物质就不会被我们发觉（然而我们并不能像对宏观物体拍照片一样对微观物质亮度较低的位置进行单独的补光），相反当两个物体对比度过低时照相设备也很难区分。人的眼睛和照相设备一样也有宽容度的要求，虽然目前我们还不知道眼睛宽容度的具体数值。
　　由于宽容度的原因，我们从显微镜看到的微观世界并不是微观物质完全的真实反应。很多大于显微镜分辨距离的颗粒或物体我们不一定能够看到，这和我们不能直接看到太阳黑子、白天不能看到天空的星星、晚上的月亮会时圆时缺、亮灯时看不到灯泡表面的细小灰尘是同样的道理。但是直接的观看要比照片和视频看到的层次更加的丰富，视频有明暗的过度因此比照片显示的层次更丰富。
　　眼睛和照相设备的宽容度与微观物质之间的较大或较小的亮度对比度是限制光学显微镜分辨率进一步提高的重要原因之一。
　　（4） 暗场原理。暗场显微镜和荧光显微镜都是无意地利用了宽容度原理，将环境或背景的亮度尽量降低，因此能看到明场（透射式）显微镜看不到的部分颗粒。但是普通暗场显微镜是逆侧光，标本正面的亮度是微观颗粒的绕射和其它颗粒的反射，因此亮度低、细节反映较差，更不能适应非透明物质。目前的金相暗场显微镜不能调整照明光的照射角度，因此看不到溶解于水中的颗粒。荧光显微镜的使用范围更小。
　　该显微镜的照明光从正侧面照亮标本，没有任何的照明光线能直接进入物镜，光照角度，的调节能使处于物镜焦距部分的标本的反光正好进入物镜，所以该显微镜在提高标本正面亮度的同时又提升了暗场效果。
　　（5） 调光原理。照射角度大时标本被照亮的深度大，反之标本被照亮的深度小。因此在20—30o范围内调整光源的入射角度可以看到物体内部不同深度的颗粒，也可以像观察宏观物体一样只看到物体高低不平连续不断的表面而不显示内部相对独立的颗粒。水对光线有折射作用，观察溶液时水表面的反光、经过深层水折射后的反光、溶液中颗粒的反光三种光线同时进入物镜，三种光线相互干扰降低了暗场效果。调整或降低光源的照射角度可以降低水被照亮的深度，减少经水折射后的反光，突出溶液中颗粒的反光，因此只有经过耐心细致的调节光照角度才能看到溶液中的颗粒。
　　（6） 物镜的焦距可以随镜筒长度（同目镜的距离）的变化而发生改变，在一定的范围内镜筒长度越小，物镜的焦距就越大，总放大倍率就越小。较大的物镜焦距可以方便使用和操作，即有利于照明光的进入，又可以减少对标本的过度加工，还有利于保护镜片。
　　2、 顺侧光调光显微镜的简易