第6章DNA重组与克隆概论.ppt

Variations on the basic PCR technique Multiplex PCR （复合PCR） is for amplification of multiple targets in a single PCR experiment. Save time and effort Variations on the basic PCR technique Reverse transcription PCR (反转录PCR) and Real-time PCR (实时定量PCR): Gene expression. Slide PCR (涂片PCR ): DNA amplification from cell samples on microscopic glass slides. Pathology slides. Reverse PCR (反向PCR) Anchored PCR (锚定PCR ) Application of PCR(应用) The characteristics of PCR decide its application. Research applications (研究): Any methods need to rapid production of short pieces of DNA including DNA Cloning, Sequencing. Medical applications : Diagnosis of diseases, blood typing (临床疾病诊断，器官移植配型). Forensic Science: paternity testing , individual identification (法医学亲权鉴定，个体识别). Archaeology: Ancient DNA Summary（小结） PCR is a molecular technique for the in vitro DNA amplification (核酸体外扩增技术). The principle of PCR is based on semiconservative replication. PCR procedures (PCR循环三步曲：高温变性，低温退火，中温延伸) PCR components (PCR 五要素： DNA模板，引物，Taq 聚合酶，dNTPs，缓冲液 ) DNA克隆及相关的基因操作技术及其应用在后续章节专门讲授 思考题 1. 简述DNA重组的概念与意义。 2. 什么是同源重组？同源重组有哪些分子模型？ 3. 细菌基因转移的机制有哪些？各有何特点？ 5. 简要叙述真核生物减数分裂中同源重组的分子机制。 7. 简述转座子的概念，原核生物和真核生物的转座子各有哪几类？ 11. 概述PCR的基本过程和优化PCR反应体系的方法。 * * 6.3.2.3 第三类转座子 　　第三类转座子又名复合型转座子(composite transposon)，由2个IS和一段带有抗生素抗性的间插序列组合而成，其中的2个IS位于转座子的两侧，具有相同或相反的方向。 表6-3 几种第三类转座子的特征 转座子 抗性基因 长度(bp) 插入序列 Tn5 抗卡那霉素(KanR) 5 700 IS50 Tn9 抗氯霉素(CmR) 2 638 IS1 Tn10 抗四环素(TetR) 9 300 IS10 6.3.2.4 第四类转座子 　　 第四类转座子的典型例子是Mu噬菌体(Bacteriophage Mu)，它是E.coli的一种温和噬菌体，具有裂解和溶源生长周期。 Mu噬菌体的DNA可以通过转座的方式随机整合到宿主DNA中，还可以通过复制型转座，随机插入到宿主DNA的其他区域，它容易诱发宿主细胞的各种突变，因此被称为突变子(mutator)。 A基因编码的MuA为转座酶， B基因编码的MuB为ATP酶 MuB还通过与MuA的蛋白质-蛋白质相互作用，阻止MuB结合到已经与MuA结合的DNA区域的附近，使Mu噬菌体周围的DNA不易成为Mu转座子的靶点，这种现象称转座目标免疫(transposition target immunity)。 6.3.3 真核生物的转座子 　　 转座是真核生物极为普遍的现象。根据转座方式可将真核生物的转座子分为两大类： 以DNA-DNA方式转座的转座子，称DNA转座子(DNA transposons)。 以DNA-RNA方式转座的逆转录转座子，称逆转录转座子(ret