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一、色谱分析法概述 色谱分析法已成为当代科技迅速发展时期的最适宜的最重要的分离分析方法，形成了一门新兴学科――色谱法。气相色谱、液相色谱、凝胶渗透色谱、离子色谱等都得到了广泛深入的应用。 1、色谱方法的分类 随着色谱理论的不断完善和色谱技术的进步，其分类方法众多，常见的如下： 2、色谱技术问题 色谱技术有如下几方面： 3、色谱仪器 色谱仪器是验证色谱理论和色谱技术应用的重要手段，也是建立各种分析方法的必须条件。上世纪90年代以来，色谱仪器的多样化、高精化、智能化等程度日新月异。著名的色谱仪器厂家有：美国的安捷伦公司、日本的岛津公司、waters公司等，国内的上海、大连等公司也生产了质量较高的色谱仪。 4、色谱法的应用 由于色谱法独具特点，使它在各领域中获得广泛的应用。 二、色谱法的本质及流程 1、? 色谱法的本质 色谱法的本质在于色谱柱高选择性和高效能的分离作用与高检测技术的结合。 2、? 色谱方法的装置系统流程 色谱方法装置流程图见下图 三、色谱分析法的一般特点 1、? 高选择性 色谱分析方法对那些性质极为相似的物质，如同位素、同系物和烃类异构体等有良好的分离效果。这种选择分离，主要采用高选择性固定液，使各组分间的分配系数能产生较大的差别而实现保留值不同。 四、色谱基本理论 1、? 色谱图 色谱图是色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或载气流出体积的曲线图。色谱图是色谱基本参数的源流，可根据色谱图中峰位置点进行定性，根据峰高或峰面积进行定量；根据各峰不同的位置及其峰宽变化状态，可对色谱柱的分离性能进行评价，表征色谱操作条件的优劣。 2、色谱图相关名词 （色谱）峰（Chromatographic）Peak 色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生的响应信号的微分曲线。 峰底Peak base 峰的起点与终点之间连接的直线（见图3中的CD）。 峰高（h）Peak Height 从峰最大值到峰底的距离（见图3中的BE）。 峰宽（W）Peak Width 在峰两侧拐点处作切线与峰底相交两点之间的距离（见图3中的KL）。 三、色谱基本参数 1、? 死时间（tM）Dead time 不被固定相滞留的组分，从进样到出峰最大值所需的时间（见图3中的tM）。 2、? 保留时间（tR）Retention time 组分从进样到出现峰最大值所需的时间（见图3中的tR） 调整保留时间（t’R）Adjusted retention time 减去死时间的保留时间（见图3中的t‘R） t’R＝tR—.tM 3、? 死体积（VM）Dead Volume 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的载气体积。 色谱的定性分析 一般定性 1、用已知物直接对照法定性 利用已知物直接对照法定性，是一种简单可靠的定性方法，在具有已知标准物情况下常使用这种定性方法。该方法定性的依据是：在一定的柱条件（柱长、固定相），操作条件下，组分有固定的保留值。因此，控制条件一定，比较已知物和未知物的保留值，就可方便地确定某一色谱峰是什么物质。 A、利用保留时间和保留体积定性 利用保留时间tR定性是最简单地一种定性方法。只要准确测量未知物和标准物地保留时间进行比较，相同者为同一物质。利用保留时间定性，缺点是tR受操作条件影响大，载气流速微小的波动、稳定微小的变化都会使tR改变，从而给定性带来困难。用保留体积VR定性，不受载气流速的影响，操作也很方便。 百分含量的计算 1、? 归一化法 归一化法是常用的一种简便、准确的定量方法。使用这种方法的条件是样品中所有组分都出峰，将所有出峰组分的含量之和按100％计，当测量参数为面积时，计算如下： xi%=×100 式中 xi---试样中组分i的百分含量； fi---组分i的校正因子； Ai---组分 i的峰面积。 如果样品中组分是同分异构体或同系物，已知校正因子近似相等，就可以不用校正因子，将面积直接归一化，即可按下式计算： xi(%)=×100 xi(%)=×100 ? 归一化定量的优点是方法准确，进样量的多少与结果无关，仪器与操作条件对结果影响小。缺点是某些组分在所用检测器上可能不出峰，样品中含有沸点高，出峰很慢的组分，不需定量的个别组分可能分离不好，重叠在一起，影响面积的测量，使其应用受到一定程度的限制。 定量分析误差的来源 除峰面积与校正因子测量精度外，定量结果的准确性还受如下因素的影响： 1、? 样品的稳定性及代表性 样品的代表性是得到准确定量结果的前提。 气相色谱分析的许多样品是气体或挥发性液体，因此，要特别注意泄漏、挥发等问题，同时，从取样到进样要快速，尽量避免样品组分的挥发损失。 液相