多聚酶链式反应扩增DNA片段解析:.ppt

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* 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 DNA指纹法在案件侦破中有重要作用,刑侦人员通过案发现场的血液、头发等样品中提取的DNA,与犯罪嫌疑人的DNA进行比较,就由可能为案件的侦破提供证据。 讨论: 1.犯罪嫌疑人留在现场的样品一般都是极少量的,刑侦人员要怎样才能得到足够量的DNA呢? 2.你还能说出DNA鉴定技术在其他方面的应用吗? ★分子生物学研究中最强大的实验技术之一 ★其本质是在体外模拟细胞内DNA分子复制的过程 美国科学家 穆利斯(K.B.Mullis) 发明了PCR技术  1993年诺贝尔奖 (一)DNA分子的结构 C、H、O、N、P 1.元素组成: 脱氧核苷酸 2.基本单位: 一、基础知识 脱氧核苷酸 脱氧核苷 磷酸 脱氧核糖 含氮碱基 嘌呤 嘧啶 腺嘌呤(A) 鸟嘌呤(G) 胞嘧啶(C) 胸腺嘧啶(T) 一个核苷酸上的磷酸基团上的“-OH”和另一个核苷酸分子的第3位碳原子上的羟基之间失去一分子水,形成磷酸二酯键,即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二酯键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’,5’-磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“-OH”末端称为3’端,而磷酸基团的末端称为5’端 3.脱氧核苷酸链的形成 脱氧核苷酸链结构简图 DNA分子的平面结构 A T G C A G C T 氢键 5'端 3'端 5'端 3'端 识别 : -OH端为3′; 磷酸基团的末端为5′。 4.DNA分子的双螺旋结构 ⑴.DNA分子是由 的(即一条链为3’-5’,另一条链为5’-3’)脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。 ⑵. 与 交替连结,排列在外侧,构成基本骨架; 排列在链的内侧。 ⑶.两条链上的碱基通过 连结起来,形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律:即腺嘌呤一定与 配对, 一定同胞嘧啶配对。 双螺旋 两条反向平行 脱氧核糖 磷酸 碱基 氢键 胸腺嘧啶 鸟嘌呤 (1)DNA分子是由 的(即一条链为3’-5’,另一条链为5’-3’)脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。 4.DNA双螺旋结构特点: (2) 与 交替连结,排列在外侧,构成基本骨架; 排列在链的内侧。 (3)两条链上的碱基通过 连结起来,形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律:即腺嘌呤(A)一定与 配对, 鸟嘌呤(G)一定同 配对。 两条反向平行 双螺旋 脱氧核糖 磷酸 碱基 氢键 胸腺嘧啶(T) 胞嘧啶(C) (二)DNA的复制: 1.概念: 由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程。 2.时期: 有丝分裂间期,减数第一次分裂前的间期。 3.场所: 细胞核(主要)、线粒体、叶绿体 4.基本条件: 酶:解旋酶、DNA聚合酶 能量:ATP 原料:四种脱氧核苷酸 模板:DNA的两条链 5.复制特点: a.边解旋边复制 b.半保留复制 6.遵循原则: 碱基互补配对原则 7.精确复制的原因 a.规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板 b.碱基互补配对保证了复制准确无误的进行 8.复制的意义: DNA分子通过复制将遗传信息从亲代传给了后代,保持了遗传信息的连续性。 引物 DNA聚合酶 4种脱氧核苷酸 DNA母链 解旋酶 在DNA复制中的作用 参与的组分 总结:细胞内DNA复制的基本体系 打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物( RNA) 打开DNA双链 模板 合成子链的原料 催化子链合成 使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸 思考:体外扩增DNA时,如何提供与体内DNA复制相似条件? 变性( 80~100℃ ) Taq DNA聚合酶 (耐高温) 20~30个核苷酸构成DNA或RNA 二、PCR(多聚酶链式反应) (一)PCR原理 DNA双链 变性(加热80-100℃ ) 复性(缓慢冷却) DNA单链 变性的目的: 解开双链 复性的目的: 有利于引物1和引物2与两条单链的结合 PCR扩增仪 PCR扩增仪实际上就是一台能够自动调控温度的仪器,它可以根据DNA的热变性原理,通过自动改变温度,达到扩增DNA片段的目的。 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间(min) 温度 (℃) 适温延伸 高温变性 低温复性 重复1~3步30轮 DNA复制的方向: DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸 变性 →复性(退火) → 延伸 (二)PCR的反

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