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生物选修三知识点 专题一 基因工程 一、基因工程的概念及基本工具 1、概念： 操作环境：体外 操作水平： 原理： 优点：定向改造生物性状 2、基因工程的基本工具 （1）“分子手术刀”： 1）来源：主要是从 生物中分离纯化出来的。 2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开，因此具有专一性。 3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 常用类型 E·coliDNA连接酶 T4-DNA连接酶 来源 T4噬菌体 功能 连接黏性末端 连接 结果 缝合被限制酶切开的两个核苷酸之间的 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是 它是一种裸露的、结构简单的、独立于 之外，并具有 能力的双链环状DNA分子。 （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、 等 二、基因工程的基本操作程序 （一）、目的基因的获取 1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。 2.获取方法：从基因组文库中获取、利用 扩增目的基因、利用 人工合成。 人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 3.PCR技术扩增目的基因 （1）原理： （2）过程： 第一步：加热至90～95℃DNA解链； 第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 （二）、基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中 ，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够 和发挥作用。 2.组成：目的基因、 、 、 等 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的 ，是 识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的 。 （3）标记基因的作用：是为了 受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细 胞 出来。常用的标记基因是抗生素基因。 （三）、将目的基因导入受体细胞 1.转化的概念： 是目的基因 内，并且在受体细胞内维持 的过程。 2.常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞： 、基因枪法、花粉管通道法等。 将目的基因导入动物细胞： ，受体细胞多是 。 将目的基因导入微生物细胞：先用 处理细胞，使其成为 ，再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程）） 核移植 胚胎移植 （5）体细胞核移植技术的应用： ①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； ②保护濒危物种，增大存活数量； ③生产珍贵的医用蛋白； ④作为异种移植的供体； ⑤用于组织器官的移植等。 （6）体细胞核移植技术存在的问题： 克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。 3.动物细胞融合 （1）动物细胞融合也称细胞杂交，是指 或 动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的 细胞，称为杂交细胞。 （2）动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较： 比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导手段 用法 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 离心、电刺激、振动，聚乙二醇等试剂诱导 克服了远缘杂交的不亲和性，获得杂种植株 动物细胞融合 细胞膜的流动性 使细胞分散后诱导细胞融合 除应用植物细胞杂交手段外，再加 诱导 制备单克隆抗体的技术之一 （3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞