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考点120  关注生物新技术——动物细胞融合与单克隆抗体 1.动物细胞融合 (1)概念:两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 (2)原理:生物膜的流动性。 (3)方法:聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。 (4)意义:①突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能;②成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段;③制备单克隆抗体。 2.单克隆抗体 (1)取相应B细胞前必须先注射相应抗原,形象地说先“打针”,否则失败。 (2)诱导融合的两种细胞名称及作用。 免疫过的B淋巴细胞(浆细胞)——产生抗体;骨髓瘤细胞——无限增殖。 (3)诱导融合与原生质体融合的不同方法。 动物细胞诱导融合的特有方法——灭活的病毒诱导。 (4)两次筛选的目的及方法 ①在特定的选择培养基上,未融合的亲本细胞(浆细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有融合的杂种细胞(杂交瘤细胞)才能生长。这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖,又能产生单一的特异性抗体。 ②经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞),需经克隆化培养和抗体检测,经多次筛选后就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 (5)两种培养提取场所 ①体外培养——培养液提取。 ②体内小鼠腹腔中培养——小鼠腹水中提取。 拓展提升 植物体细胞杂交和单克隆抗体的制备的比较 动物细胞融合(单克隆抗体的制备) 植物体细胞杂交 (1)物、化法:与植物细胞融合相同;(2)生物法:灭活的病毒 (1)物理法:离心、振动、电刺激等 (2)化学法:聚乙二醇(PEG) 促融 方法 注射特定抗原,免疫处理正常小鼠 酶解法去除细胞壁(纤维素酶、果胶酶) 融合前处理 细胞膜的流动性、细胞增殖 细胞膜的流动性、细胞的全能性 理论 基础 单克隆抗体的提纯 杂种植株的诱导与鉴定 第四步 杂交瘤细胞的筛选与培养 杂种细胞的筛选和培养 第三步 动物细胞的融合 (物、化、生法) 原生质体的融合(物、化法) 第二步 正常小鼠免疫处理 原生质体的制备(酶解法) 第一步 过程 对位训练 5. 1975年科学家首次利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。请据图回答问题: (1)病原体注入小鼠体内后,要经过____细胞处理后,才能被免疫细胞识别。 (2)制备单克隆抗体所用的B淋巴细胞一般从脾中采集,然后以________________________作诱导剂,使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合。通过筛选和克隆培养,获得的杂交瘤细胞具有____ ____________________________ 吞噬 灭活的仙台病毒或聚乙二醇 产生特异性抗体,又能无限增殖 既能 的特点。 (3)单克隆抗体的特点是________________。根据上图写出应用杂交瘤技术获得单克隆抗体的两种主要方法_________ __________________。 解析 灭活的仙台病毒和聚乙二醇均可诱导动物细胞融合。杂交瘤细胞同时具有两个亲代细胞的遗传特性。可以在体外也可以在体内培养杂交瘤细胞获得单克隆抗体。 排雷 (1)制备单克隆抗体时选用一种抗原处理的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,产生杂交瘤细胞,它会兼有两个亲本细胞的特性——在体外培养条件下能不断增殖,同时能产生出某种特异性抗体。 (2)在诱导剂的作用下进行细胞的诱导融合,形成的杂种细胞有三种:AA型、BB型、AB型,只有AB型才是我们所需要的杂种细胞,所以需要用选择性培养基进行筛选。 特异性强,纯度高 和动物体内培养法 体外培养法 (3)相比较植物体细胞杂交,动物细胞融合特有的诱导方式为灭活的病毒处理,其他物理、化学诱导融合的手段与植物体细胞杂交过程中原生质体融合方法相同。 考点121  关注生物学热点内容——动物细胞核移植 与克隆技术引起的伦理问题 1.概念:动物细胞核移植是将动物的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体。 2.操作流程 3.考点解读 (1)原理:动物细胞核的全能性(不能说动物细胞全能性)。 (2)卵母细胞选择时期及原因 减Ⅱ中期的卵母细胞,此时具备受精能力,细胞质中合成与分裂、分化有关的物质能刺激融合后重组细胞进行分裂分化,形成重组胚胎。 (3)选卵细胞作为受体细胞的原因 ①大,易于操作;②卵黄多,营养丰富,

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