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第五章 分子发光分析法 分子荧光、磷光分析法的基本原理 荧光分析仪器 分子荧光定量分析 简介化学发光（自学） § 5- 1 分子发光分析法及其分类 分子发光分析法 根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类： 光致发光：以光能来激发而发光 化学发光：以化学反应能激发而发光—化学发 光分析法 热致发光 、生物发光、电致发光 § 5- 2 荧光和磷光光谱法 一、荧光和磷光光谱的产生 基态分子光照后，价电子跃迁产生荧光和磷光 基态分子 价电子跃迁到激发态 1. 电子自旋状态的多重性 分子中的电子数及自旋方向 T1、T2、T3分别表示第一、二、三激发三重态 由基态单重态→激发三重态，净自旋 ? 0。这种跃迁为禁阻跃迁 2. 无辐射去激 外部转移—激发态分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用产生能量转移，荧光或磷光减弱或消失 振动驰豫(VR)—同一电子能级中，从较高振动能级到较低振动能级的过程 内部转换(IC)—相同的多重态之间的转换 S-S 系间窜跃(ISC)—不同的多重态之间的转换S-T 发生系间窜跃电子需转向，S1—T1间进行，比内部转换困难 3.辐射去激—荧光和磷光产生 S1或T1 S0 这种过程叫辐射去激 特点： 产生速度快，10-9~10-6s； 依赖于外部光源 ? 荧?激 （2）磷光 S1 T1 S0 磷光 特点： 发光速度慢，约为 10-4 ~ 10s， 光照停止后，磷光仍可持续一段时间 磷光的波长更长 ? 磷 ? 荧 ?激 ? ? ?* 易产生荧光 n ? ?* 易产生磷光 二、荧光、磷光与分子结构的关系 （一）荧光效率 荧光强度常用荧光量子效率φf 来描述 荧光量子效率 ?f = ? f 是一个物质荧光特性的重要参数，反映了荧光物质发射荧光的能力， ? f 越大，荧光越强，在0~1之间。 分析上有应用价值的荧光化合物的荧光效率大于0.1。 （二）荧光磷光与有机化合物结构的关系 至今对激发态分子的性质了解不深，无法定量地描述荧光与分子结构之间的关系 物质只有吸收了紫外可见光，产生? ? ?*、n ? ?*跃迁，产生荧光 ? ? ?*与n ? ?*跃迁相比，摩尔吸收系数大102~103，寿命短 ? ? ?*跃迁常产生较强的荧光， n ? ?*跃迁产生的荧光弱，但可产生系间窜跃，产生更强的磷光 1. 共轭体系——有较强的荧光 具有共轭体系的芳环或杂环化合物, ?电子共轭程度越大，越易产生荧光; 环越多，共轭程度越大, 产生荧光波长越长，发射的荧光强度越强 2. 刚性平面结构—较稳定的平面结构 具有强荧光的分子多数有刚性平面结构 例 1，2 - 二苯乙烯 （三）取代基的类型 （1）增强荧光的取代基 -OH、-OR、-NH2、-NHR、-NR2等给电子基团 由于基团的 n 电子（孤对电子）的电子云与苯环上的 ? 轨道平行，共享了共轭 ? 电子，扩大了共轭体系，使荧光波长长移，荧光强度增强 （2）减弱荧光的取代基 -COOH 、 -NO2 、-COOR 、-NO、-SH 吸电子基团, 使荧光波长短移，荧光强度减弱 芳环上被F、Cl、Br、I 取代后，使系间窜跃加强，磷光增强，荧光减弱。磷光相应增强，这种效应为重原子效应。 （3）影响不明显的取代基 -NH3+、-R、- SO3H等 三、环境对荧光、磷光的影响 1. 溶剂的影响 不同的溶剂中可能表现出不同的荧光性质 溶剂的极性增强，荧光波长红移，强度增大 2. 温度的影响——低温下测定，提高灵敏度 因为辐射跃迁的速率基本不随温度变; 非辐射跃迁随温度升高显著增大。 荧光效率会随溶液温度升高下降，强度减弱。 温度对磷光影响更大 3. pH的影响 大多数含有酸性或碱性基团的芳香族化合物的荧光性质受溶液pH的影响很大 共轭酸碱对是具有不同荧光性质的两种型体，具有各自的荧光效率和荧光波