植物的抗寒性检测分析报告.pptVIP

Company Logo LOGO 植物的抗寒性检测 主讲人员： 小组代号： 小组成员： Company Logo 实验主要内容 实验背景 实验目的 实验原理 实验步骤 1 2 3 4 注意事项 5 Company Logo 实验背景 我国植物种类繁多，分布区域广，在晚秋和早春时期发生的冻害和冷害两种低温危害， 常常给越冬作物和果木造成严重伤害。冻害由 0℃以下低温造成，冷害由 0℃以上低温引起， 冷害对植物的伤害程度，除取决于低温外，还取决于低温维持时间的长短。 植物抗寒性的强 弱决定其生长季节，因此蔬菜作物利用抗寒品种，可以将露地栽培提前，提早供应市场；而 选育抗寒性强的果树品种，不仅是寒带果树育种者的主攻方向，而且也是温带甚至热带果树 育种者重要育种目标之一。 本实验重点学习实验室间接鉴定植物抗寒性的检测方法。 Company Logo 实验目的 Your Text here Your Text here Your Text here 1、了解植物的抗寒性机制并掌握实验室间接鉴定抗寒性的检测方法。 2、掌握用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术分离 POD 同工酶的原理和技术。 Company Logo 实验原理 实验室间接鉴定就是根据作物某些生理生化指标及物理指标间接推断供试材料的抗寒性。 在一定低温范围内，植物体内自由基的产生和清除之间基本上可以保持平衡。当温度持续下降时，活性氧自由基就会明显增加，清除剂含量降低，导致自由基积累，造成膜脂氧化。生理生化指标主要包括超氧物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）活性测定及同工酶分析、丙二醛（MDA）及可溶性糖含量等方法。 Company Logo 实验原理 本实验采用同工酶分析测定法。 同工酶带相对迁移率计算： Rf＝ 酶带迁移距离/溴酚蓝迁移距离 研究表明，过氧化物同工酶与植物抗寒性的关系极为密切，抗寒性强的品种的同工酶带一般比抗寒性差的品种多 1～3 条，且随着温度下降变化缓慢。 Company Logo 实验步骤 实验步骤 6、同工酶带相对迁移率计算 1、材料处理 2、贮液的配制 3、凝胶板的制备 4、电泳 5、染色 Company Logo 一、材料处理 植物枝条（花朵），将采回的枝条剪成 40cm 左右的长度，用自来水冲洗数遍（洗掉泥土、灰尘），再用蒸馏水冲洗三次，然后用吸水纸吸干水分，最后将枝条末端进行蜡封。将每个品种蜡封后的枝条分成相等的6 份，其中一份作为对照，其余每份作为一个低温处理，放于冰箱中（0℃～4℃）保存备用。每次处理时，各取参试品种的一份枝条放于超低温冰箱低温处理，处理温度梯度为：CK（0℃），-20℃，-25℃，-30℃，-35℃，-40℃。降温速度为 4℃/h，达到目的处理温度后维持 12h，然后逐步升温，升温速度亦为 4℃/h。花朵的处理温度梯度为：CK（0℃），-1℃，-3℃，-5℃，-6℃，-7℃，-8℃。 Company Logo 二、贮液的配制 A．30%Acr－0.8%Bis 贮液 B．1M Tris-HCl 缓冲液（pH 值 8.8） C．1M Tris-HCl 缓冲液（pH6.8） D．电极缓冲液 E．1%过硫酸铵溶液 F．溴酚蓝溶液 贮液的详细配制 Company Logo 三、凝胶板的制备 ①分离胶的制备 分离胶浓度多为 7%，按照表 5－3 进行 配制。先用刻度吸管准确地吸取 30%Acr－ 0.8%Bis 和 1M Tris-HCl（pH8.8）于抽 滤瓶中，用电动吸引器减压抽气，除去溶液中 气泡，抽气毕，再加入 1%过硫酸铵溶液和 TEMED，摇匀后，小心地将凝胶加入凝胶板 模具内，上面加一水层，在 25～30℃的地方 进行聚胶，约 1h。 Company Logo 表 5－3 贮 液 不同配量及凝胶浓度所需贮液（ml） 20ml 30ml 5% 7% 10% 5% 7% 10% 30%Acr－0.8%Bis 3.2 4.5 6.5 4.9 6.8 9.7 1M Tris-HCl pH8.8 16.3 15.0 13.0 24.3 22.4 19.5 1%过硫酸铵 0.5 0.5 0.5 40 0.8 0.8 TEMED（为μl） 20 20 20 40 40 40 Company Logo ②隔层胶的配制 按表 5－4 进行隔层胶的配制，用刻度吸管准 确吸取 30%Acr－0.8%Bis 和 1M Tris- HCl（pH6.8）于抽滤瓶中，用电动吸引器减 压抽气，与此同时，吸去分离胶上层的水层， 抽气毕，加入 1%过硫酸铵溶液和TEMED， 立即灌注隔层胶（凝胶板需要迅速加入蓖子） ，其中加一水层，约 1h 可聚合好。