植物细胞工程实验指导修改分析报告.docVIP

广东省教育厅重点实验室——现代生物技术实验室实验教材 植物细胞工程实验指导 陈远玲 李 静 编著 华南农业大学 现代生物技术实验室植物细胞工程分室 2005年2月 编 者 的 话 这本教材是为广东省教育厅重点实验室——现代生物技术实验室中植物细胞工程实验课程编写的，所开实验面向石牌地区六所高校的高年级本科生和本校研究生。本课程总学时52.5。实验一至六及实验八为本科生课程内容；实验一至七及实验九为研究生课程内容。 在实验内容选择上，兼顾不同专业、不同层次学生的要求，既有较为实用化的技术如快繁、微茎尖培养脱毒、细胞悬浮培养等技术，也有研究性较强的技术如原生质体培养、细胞融合、遗传转化等技术,力争使选课者对植物细胞工程技术有一个较全面的了解和掌握。各校选课者可根据自己的需要选修其中的内容。 在实验顺序安排上，遵循由易到难的原则，由培养基配制→器官培养→组织培养→细胞培养→原生质体培养→细胞融合→遗传转化。 本教材是在总结我室多年的研究经验和成果，以及多年来对研究生和本科生开课经验的基础上写成的。教材的最初版本写于1996年，2000年作了部分修改。为了适应新的教学需要，培养学生进行研究性学习的能力，这次编写对实验内容作了较大增改，并提高了教学要求。近年来我们对研究生试行3期开出了5个、本科生试行1期开出了4个综合设计性实验，取得了很好的教学效果。在本次改编时，正式编写了6个综合设计性实验（实验2、3为综合及设计性实验；实验6－9为综合性实验）。有能力、感兴趣的学生可自行设计试验，探索有关的科学问题或解决生产实际问题。 我们衷心希望本书的使用者提出宝贵意见，以使本课程教学收到更好的效果。 编 者 2005年2月 目 录 实验一 培养基的配制与灭菌………………………………………… 1 实验二 愈伤组织的诱导与分化……………………………………… 5 实验三 几种植物快速无性繁殖方案的探索………………………… 7 实验四 微茎尖脱毒培养……………………………………………… 12 实验五 植物细胞悬浮培养…………………………………………… 14 实验六 植物原生质体游离与培养…………………………………… 16 实验七 植物细胞融合………………………………………………… 19 实验八 植物遗传转化——基因枪法………………………………… 21 实验九 植物遗传转化——农杆菌介导法…………………………… 24 附录1 植物组织培养常用培养基…………………………………… 27 附录2 常用激素的溶解……………………………………………… 28 附录3 常用消毒剂的使用和效果…………………………………… 28 附录4 水稻原生质体培养所用洗液及培养基……………………… 29 附录5 Sartorius PB-10 型酸度计简明操作指南…………………… 31 参考文献 ………………………………………………………………… 32 实验一 培养基的配制与灭菌 一、目的 掌握植物培养基的基本成分及其作用；掌握植物培养基的配制方法；掌握培养基及各种用具的灭菌方法 二、原理 （一）培养基 在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养成分、生长因子、理化环境等主要由培养基提供。不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基，对组织培养取得成功是至关重要的。另外，组织培养物的脱分化、分化等状态的调控，次生代谢物的产出等都要通过调节培养基成分来实现。 培养基实际上是一个人工模拟的植物生长、发育环境，它通常包括下列成分（表1）： 表1　培养基的组成成分及其作用 类 别 成　　分 作　　用 无机盐 大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、I、Co等 植物生长所必需的营养元素 有机物 营养物：糖类、氨基酸及酰胺类 生理活性物：维生素等 为植物细胞提供C、H、O、N等必要元素；作为生理活性物质在细胞代谢中起一定作用；糖类还可调节培养基的渗透压 植物生长调节剂 植物天然的五类激素及其人工合成的类似物 作为生理活性物质参与植物生长发育的调节，是细胞信号转导网络中重要的化学信号分子 附加物 如琼脂、活性C等 固化剂可使外植体固着、定位生长；活性C可吸附外植体所分泌的有害物质，利于细胞生长 其他未加复合成分 如椰子水、酵母提取物、香蕉、西瓜水、马蹄汁 供给一些必要的微量营养成分、生理活性物和生长激素等，缓冲pH值 几种常见的培养基配方见附录1。 配制培养基可以直接称量。但为了提高称量的准确性并减少多次称量的麻烦，通常都按配方浓度的若干倍称量，配制成一系列的母液置于冰箱保存，用时按比例稀释。一般要配下列母液： 1. 微量元素母液：除铁盐外的其他微量元素盐