中药制剂分析报告.ppt

薄层扫描分析法在黄酮类化合物含量测定中的应用研究概况 111508036 王彩丽 111508037 王 蓉 111508038 王 昕 111508039 王志斌 111508040 吴双平 目的：建立槐米中有效成分芦丁的薄层扫描测定方法。 方法：取槐米干品，采用乙醚提取，弃去乙醚层后，用乙醇连续回流提取，分离出不同的黄酮类成分，采用薄层扫描仪器对黄酮类化合物进行含量测定。 结果：芦丁呈良好的线性关系。 结论：本法可用于槐米中芦丁的含量测定。 黄酮类化合物（flavonoids）是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）结构的化合物。它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其羟基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，小部分以游离态（苷元）的形式存在。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方面起着重要的作用槐米具凉血止血之功效, 用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕。槐米是常用中药材, 其主要有效成分为芦丁, 也是提取芦丁的主要原料, 芦丁主要用于出口与合成维脑路通。中国药典采用比色法测定槐米中芦丁含量, 条件较难掌握, 且操作繁琐。本文采用薄层扫描法测定槐米中芦丁的含量, 操作简便、快速、分离度好、结果准确。 薄层扫描法( TLC- Scanning method) 亦称薄层光密度法( TLC- Densitometry) , 是薄层色谱技术与光密度计和微型电子计算机结合起来的一种新型仪器分析方法。应用薄层扫描仪或称薄层光密度计可同时对各种复杂的样品进行分离和测定, 简便快速、灵敏准确、专属性好。 因此, 在医药学领域得到广泛应用, 尤其在药品检验工作中, 现已被国内外药典普遍采用。 一、基本原理 二、方法与结果 三、小结 薄层色谱法在各国已公认为法定方法[ 1、3] , 但作为定量测定的薄层扫描法, 虽然早在50 年代初就已进行研究, 但进展较慢。直至70 年代后, 成功地应用了Kubelka- Munk 理论推导出反射吸收度与浓度的函数关系才得到发展。虽然当浓度增加至一定程度时不成线性, 且与薄层板的性质有关,但是, 随着计算机技术的发展与联用, 问题得以解决。即在薄层光密度计内装有线性化器, 由微型计算机的程序控制,通过0~1 吸收度单位之间曲线上的7 个点进行校正, 使Kubelk 理论曲线中的非线性化数据转变为线性值, 使之符合Beer. s 定律, 即可定量测定, 详见图1。 图1 图1 Kubelk- Munk 理论与线性曲线值得注意的是, 当使用线性化装置对Kubelk- Munk 理论曲线校正时, 如果校正不足或校正过头, 都会使线性关系偏。在实际工作中, 可通过测试得以校正。 二、定量分析方法 1、试验条件的选择 （1）薄层色谱条件：原则组分应完全分离，斑点对称，均匀，不拖尾。 （2）检测方法：吸收测定法和荧光测定法两种。在可见、紫外区有吸收的组分，可在200~800nm范围内采用吸收测定法测定。有荧光的组分，可选择好激发光波长（λex）和发射波长（λem）用荧光法具有专属性强、灵敏度高和线性范围宽度等特点。 （3）测量方法：有反射法和透射法两种。反射法是将光束照射到薄层斑点上，测量反射光的强度；反射光灵敏度较低，受薄层厚度影响较小，基线较稳，信噪比较大，因而使用较多。透射法受薄层厚度影响较大，且玻璃对紫外光有吸收，所以实际应用较少。 （3）扫描方式：有单波长和双波长两种。双波长是两束不同波长的光，一束测量样品称测定波长（λS）；另一束作为对照，称参比波长（λR）。两束光通过斩光器交替照射到斑点上，以吸收度之差ΔA定量。双波长可以消除薄层不均匀的影响，使基线变得平稳。测定波长一般选测定组分的最大吸收波长，参比波长可选在组分无吸收的位置，若背景光谱中与λS的等吸收处，可达到排除背景干扰的目的。单波长法常用斑点吸收光谱的测定。 　　扫描方式还有线性扫描和锯齿扫描：线性扫描是用一束比斑点略长的光作单向扫描，扫描速度快，但斑点形状不规则或浓度不均匀时误差大，主要用于荧光测定；锯齿扫描是用一微小的光束同时互相垂直的两个方向进行锯齿状扫描，由于光束小 （1.2