细胞生物学：常规制片技术解析.pptVIP

组织学常规制片基本技术 组织学制片方法 切片法 非切片法 1.分离标本 2.活体标本 3.涂片标本 4.磨片标本 5.整体封藏标本 6.铺片标本 7.组织印片 巨噬细胞（macrophage) 石蜡切片HE染色制片方法 动物致死和取材 致死方法：麻醉、空气栓塞、股动脉放血等。 HE染色 取材 顺序：先腹腔（肝脏、胆囊、 肾、肾上腺、胰腺、脾、胃、 十二指肠、空肠、回肠、结肠），然后取胸腔和盆腔内的器官组织。 取材关键 材料新鲜 勿使组织块受挤压 组织块力求小而薄 选好组织块的切面 尽量保持组织的原有形态 保持材料的清洁 固定和固定液 固定：借助化学药品使组织和细胞中的有机和无机成分凝固成沉淀，防止发生死后组织变化，以保持其生活时状态的过程。此药品称为固定剂。 目的和意义 保持组织和细胞与正常生活时的形态相似。 使细胞内的各种成分转变成不溶性物质。 固定的对象和方法 小块组织固定法 注射、灌注固定法 蒸汽固定法 固定剂的性质和条件 迅速渗入组织而固定细胞质。 有较强的渗透力。 避免死后变化。 避免过度膨胀或收缩。 注意事项 组织必须新鲜 组织的厚度 防止因固定发生变形 用量 时间 促使固定 固定剂 单纯固定剂 甲醛 渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。经甲醛固定的组织，细胞核染色甚佳，胞质着色较差。除单独使用外，常与其他药品配成混合液，效果更佳。 氧化汞 俗称升汞，剧毒，必须严格 保管和注意使用。穿透力慢，适于固定薄块组织。能沉淀一切蛋白质，升汞可增加对酸性燃料的亲和力，如卡红等。 醋酸 又名乙酸、冰醋酸，为无色透明液体，有刺激性气味。醋酸的渗透力强。经单纯醋酸固定的组织，可不经水洗，直接入酒精脱水。用作固定剂的醋酸浓度一般在0.3-5%。 苦味酸 黄色粉末结晶。能沉淀蛋白质，对脂肪类脂无效，渗透力较弱，一般很少单独使用。 乙醇 又名酒精，为无色液体，可与水在任何比例下相混合。一般用作固定液的浓度为95%或纯酒精。 其他常用的单纯固定剂还有重铬酸钾、铬酸、四氧化锇、丙酮、三氯乙酸等。 常用混合固定剂 Bouin氏液 配方：苦味酸饱和水溶液 75 ml；甲醛 25 ml；冰醋酸 5m。此液临用时配制。 为一种常用良好的固定液，渗透力强，对组织固定均匀，收缩较小，染色效果好。一般组织固定12-24小时。 Carnoy氏液 配方：纯酒精 60 ml；冰醋酸 10 ml；氯仿（三氯乙酸） 30ml。 此液渗透迅速。适用于一般细胞学研究。固定后不经水洗，即入95%酒精脱水或直接入纯酒精，可缩短制片时间。 Zenker氏液 配方：升汞 5g；重铬酸钾 2.5g；冰醋酸 5 ml；蒸馏水 100 ml。 为组织学、细胞学及病理学常用的固定剂，多用于固定一般组织。固定时间24小时，加热固定可以加快渗透作用。固定后流水冲洗12小时，并在以后的脱水过程中除去汞盐沉淀。 其他常用的混合固定液有中性甲醛固定液、甲醛-乙醇固定液、Helly固定液等。 洗 涤 目的 组织在固定后一定要把渗入组织里面的固定液洗去，防止组织中留有较多的固定液而影响脱水剂，甚至可在组织中发生沉淀或结晶而影响观察。 常用方法 固定剂以水配制的 固定剂含乙醇的 脱 水 目的和原则 组织经固定和水洗后，含有大量的水分，而水和苯及石蜡根本不相融合，所以组织在透明前必须经过脱水这一环节。就是用某些溶剂逐步将组织块吸收的水分置换出来，以利于透明剂和石蜡等的渗入，这一过程就叫做脱水，使用的药品为脱水剂。 种类 非石蜡溶剂的脱水剂 石蜡溶剂的脱水剂] 方法 将脱水剂配成各种浓度，自低到高浓度循序进行。 常用脱水剂 酒精 为常用的脱水剂。脱水能力强，并能使组织硬化，能较好地与二甲苯透明剂相融合。其缺点是易使组织收缩，变脆。在一般脱水过程中，采用循序渐进的方法，逐步升级，经一系列的不同浓度的酒精，使组织中的水分逐渐被酒精所替代。 丙酮 脱水作用比乙醇强，但对组织块的收缩较大，价格较高，一般少用。主要用于快速脱水或固定兼脱水。 正丁醇 脱水能力较弱，但能与水、乙醇及石蜡相混合，故这种脱水的组织块可直接浸蜡包埋。这种脱水剂兼透明剂的最大优点是很少引起组织块的收缩与变脆。正丁醇在使用时易挥发，吸入后能发生头痛，使用时应注意安全。 时间：脱水时间应根据组织的体积和厚度而定，组织在纯酒精中脱水时间不能过长，过长则组织过度硬化变脆，不易切片。