COPII涂层大小和功能的泛素依赖性调控课件分析.docVIP

COPII涂层大小和功能的泛素依赖性调控 (1)将来自内质网的新合成蛋白质转入到Component of the coat protein complex II (COPII)囊泡中是蛋白质分泌的必要条件。在细胞中，大部分COPII囊泡的直径大约60-80纳米，但其中一些必须增加它们的大小来适应运载较大的蛋白，如300-400纳米的胶原蛋白纤维或乳糜微粒。COPII功能受损会导致胶原沉积缺陷,CLSD（Cranio-Lenticulo-Sutural Dysplasia）或乳糜微粒驻留病(Chylomicron retention disease)。然而现在科学家们对于COPII涂层增大的机制还并不清楚。在这篇文章中，研究人员发现了“泛素连接酶”CUL3-KLHL12是COPII涂层形成过程中的一个调控因子。CUL3-KLHL12催化COPII的成分SEC31单泛素化，促进了大COPII涂层的形成。所以，CUL3–KLHL12泛素化对胶原质的输出是必不可少的，然而对小货物（cargo）的运输作用并不明显。研究人员由此推论单泛素化作用调控了COPII囊泡的大小和功能。 (2)细胞外基质为诸如整合蛋白（integrin）等膜受体提供细胞粘附支架和结合位点，这对于所有多细胞动物的发育均至关重要。当整合蛋白（integrins）与细胞外基质相结合时，会激发调控细胞形态和分裂的信号级联反应。然而在缺乏功能性细胞外基质的情况下，整合蛋白（integrins）会通过胞吞作用（endocytosis）与质膜分离。在早期发育过程中，整合蛋白（integrins）与细胞外基质间适当的相互作用起着极为重要的作用，就如同干细胞借助整合蛋白（integrin）依赖的信号途径维持细胞分裂和生存一样。 (3)细胞外基质的构建需要几种蛋白质，其中就包括它的主要成分胶原蛋白。胶原蛋白在内质网合成后，依赖于COPII囊泡输送至细胞外，编码COPII蛋白的基因变异会导致胶原沉着缺陷、骨骼畸形和诸如CLSD（Cranio-Lenticulo-Sutural Dysplasia）等发育性疾病。 (4)COPII囊泡包裹着一层由SAR1、GTP酶（ GTPase）, SEC23–SEC24接头蛋白（adaptor）组成的涂层，SEC13–SEC31四聚体组成最外层。这些涂层蛋白组装成直径约为60-80纳米的十四面体结构，但这对于需容纳的长度为300-400纳米的前胶原纤维而言无疑太小了。因此细胞内的胶原输送必须有体外自组装反应缺少的因子参与。实际上，TANGO1 (也被称为MIA3)和它的配体cTAGE5是通过与胶原和SEC23–SEC24相互作用，招募胶原到新生的COPII涂层。在小鼠中敲除Tango1会导致与COPII缺失相似的胶原沉积缺陷，人类TANGO1突变与早发性心肌梗死相关。然而科学家们并不了解TANGO1调控COPII涂层大小和使COPII涂层适应大货物的机制。 (5)通过分析小鼠胚胎干细胞（ES）的分裂，研究者已经确定”泛素连接酶”CUL3–KLHL12是COPII涂层形成过程的一个调控因子(Fig. 1a) ，会看到“泛素连接酶”CUL3缺失能引起小鼠干细胞（ES细胞）形成带有显著的肌动蛋白锚索和异常粘附因子的紧凑红细胞群。耗竭UBA3（类似于E1泛素激活酶）可观察到一个相似的表型，一个活化“泛素连接酶”CUL3的NEDD8（泛素类蛋白）通路的成分(Supplementary Fig. 1a)。耗竭CUL3的小鼠胚胎干细胞增殖延缓(Supplementary Fig. 1b, d)，但仍然保持它们的全能性，就像在表达分析中通过0CT4-碱性磷酸酶染色分化标记物的情况下所看到的一样(SupplementaryFigs 1c, e, f and 2b)。对于小鼠胚胎干细胞正好相反，耗竭CUL3对成纤维细胞有较弱的影响，尽管以前有报道过能观察到多核化(SupplementaryFig. 1g; ref. 20)。 （2） 一些观测表明，小鼠胚胎干细胞的表型是由特定的CUL3损耗引起的。首先，一些短的干扰RNA以一种极低的效率与强表型之间的密切相关性，以CUL3信使RNA的不同区域为靶标对小鼠胚胎干细胞具有相