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植物细胞培养 代谢产物的制备 《细胞工程》 第五章 主讲人：申文丽 制作人：王路路 植物天然产物包括初级代谢产物和次级代谢产物 初级代谢产物（Primary metabolites）： 是通过初级代谢产生的维持细胞生命活动必需的物质，例如氨基酸、核苷酸、多糖、脂类、维生素等。在不同种类的细胞中，初级代谢产物的种类基本相同。 次级代谢产物（Secondary metabolites）： 是通过次级代谢合成的产物，大多是分子结构比较复杂的小分子化合物，例如抗生素、激素、生物碱、毒素等。由于次级代谢产物大多具有生物活性，因此是植物代谢产物研究的重点。 植物细胞培养途径的优点： 减少耕地占用面积，且不受季节、地域的限制 细胞培养是在无菌密闭的条件下进行的，可以排除病菌和害虫的影响 可以通过选择优良细胞系和优化培养条件的方法得到超过整株植物产量的代谢产物 通过改造生物合成途径获得新的有用物质 有价值的植物次级代谢产物: 药用代谢产物，如紫杉醇等。 天然食品、食品添加剂，如胡萝卜素、辣椒素等。 杀虫剂、杀菌剂，如农药噻吩烷、蓝鱼藤酮、粉红鱼藤酮等。 饲料、精细化工等产品，如蚕养殖所需的专用植物等。 提取：在不同红豆杉属植物树种和树木的不同部位(如树皮、木材、树叶、嫩枝和幼苗等)含量有所不同，以树皮、嫩芽中含量最高，心材最低。一般含量为0.005% 左右。生产1kg紫杉醇需要砍伐60年生大树3000-4000棵。若光从树皮中提取紫杉醇，每年需砍伐150-200万棵左右的大树。无法满足市场需求，破坏宝贵资源、不可持续发展。 化学合成：结构复杂，全合成需要几十步合成步骤，总得率仅4-5%。成本高。 1.从树叶获取细胞，利于资源保护（红豆杉属于濒危保护植物）。 2.细胞培养不受地理环境影响：地理环境、病虫害和季节等因素的影响，可以保证产物无限、连续、均匀地生产。 3.利用生物技术提高目标产物含量，实现大规模培养制备。 （1）可以通过进行红豆杉细胞的筛选，获得超过原植株紫杉醇含量的细胞。 （2）易于在生物反应器中满足最佳条件，进行大规模、高密度培养。 （3）可以进行红豆杉细胞紫杉醇代谢途径研究，利用代谢调控使细胞定向合成有用次生代谢物。 有效途径：红豆杉细胞培养制备紫杉醇 （一）植物次级代谢产物的生物合成 聚酮途径：聚酮类化合物。 莽草酸途径：喹啉类、异喹啉类、吡咯啶类、乌头类、吲哚类、大环类生物碱等。 甲戊二羟酸途径（甲瓦龙酸途径）：萜 类、甾体。 （二)影响植物代谢产物合成的因素 理论上，所有的植物细胞都具有一个完整植株的全部遗传信息，因此单个细胞也具有产生其亲本植株所能产生的次生代谢的遗传基础。但是实际上，不同取材部位的细胞产生代谢产物的能力是不同的，一些代谢产物积累与组织或器官的分化有关。因此细胞并不能像完整植株的某一部位一样高效合成所需的目的产物。因此，在进行植物细胞培养生产有价值的代谢产物时必须清楚产物的合成部位。在注意完整植株、植物的遗传性状的同时，还应该考虑到不同细胞的特性。要进行具有经济可行性的细胞培养生产目标代谢产物，首先必须选出能够比较高产量产生所需产物而且能够快速生长的细胞株。 1、细胞遗传特性 主要包括营养盐、前体和调节因子、光照、温度、搅拌与混合、通气、PH等。 （1）培养基、前体、调节因子 培养基：一方面是保证植物细胞生物量的增长；另外一方面是要保证细胞能合成和积累次级代谢产物。 普通的培养基一般仅能满足第一方面的需要，对于第二方面的需求，必须针对具体的培养对象和目的，对培养基进行优化，从而保证最大限度地积聚目标产物。 2、培养条件 前体：指某一代谢中间体的前一阶段的物质。一般在生物合成反应的中间过程中，某一阶段前的物质，都可以说是该阶段物质的前体物质。 缺乏某一种前体时细胞就不能合成某一种代谢物。如果在培养基中加入外源前体将会有助于合成该代谢产物或使其产量增加。 调节因子 狭义诱导子：是指那些能够与细胞发生相互作用，通过细胞内一系列的信号转导过程，作用于与细胞次生代谢相关的基因表达，进而改变细胞次生代谢相关酶的活力，最终使细胞次生代谢水平发生改变的物质。 广义诱导子：是指所有能够提高细胞次生代谢相关酶活力，进而提高细胞次生代谢水平的外界因素。温度、光照、紫外线、红外线等都是广义诱导子。 从来源上可以分为外源性和内源性诱导子，后者是指在外界信号刺激下细胞合成的物质。 外源诱导子：菌丝、微生物机体提取物及微生物产生的多糖、蛋白和脂肪酸等 内源性诱导子：来源于植物结构的化合物。如降解细胞壁的酶、细胞壁碎片、寡聚糖等有机分子。 诱导子促进次生产物积累与其种类和浓度有关 诱导子对南方红豆杉细胞培养合成紫杉醇的影响 诱导子 适宜浓度（mM） 与对照比提高产物效率（倍） M-JA 0