铜绿假单胞菌重金属离子耐受性调查及其相关机制研析.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2013 6 铜绿假单胞菌重金属离子耐受性调查及 相关机制的研究 1 1 2 2 1 李群  杨洪江  林书祥  王维  叶羽洁 （1. 工业发酵微生物教育部重点实验室 天津市工业微生物重点实验室 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 ； 2. 天津市儿童医院，天津 300074） 摘 要 ： 旨在调查铜绿假单胞菌临床菌株对多种重金属离子的耐受性，并对相关机制进行初步研究。测定临床菌株在含有 重金属离子培养基中的生长状况 ；构建转录融合报告基因，分析铜绿假单胞菌中RND 外排泵CzcCBA 的表达水平 ；PCR 方法结 合DNA 测序分析调节基因czcR 和czcS 的序列差异。结果显示，158 株铜绿假单胞菌临床菌株中，大多数耐受0.002 mol/L Co2+ ，1 株不能在0.00 1 mol/L Co2+ 条件下生长，对照菌株ATCC27853 在0.003 mol/L Co2+ 条件下能够生长。分析其中2 株临床菌株和对照 菌株ATCC27853 对其它重金属离子的耐受性，结果显示其耐受趋势与Co2+ 一致。进一步分析了转录融合报告基因 - 在临 czcC lacZ 床菌株中的表达水平发现，β-半乳糖苷酶活力与重金属离子耐受性一致，重金属离子能够诱导β-半乳糖苷酶活力的提高。对操纵 子czcCBA 的调节基因czcR 和czcS 序列分析显示，3 株菌株中调节蛋白CzcR 的氨基酸序列相同，而蛋白CzcS 的氨基酸序列则存在 多处差异。得出结论，铜绿假单胞菌临床菌株对重金属离子存在耐受性，耐受程度与外排泵CzcCBA 的表达水平相关，调节蛋白 CzcS 某些氨基酸的突变，可能改变了操纵子czcCBA 的表达水平。 关键词 ： 铜绿假单胞菌 重金属离子耐受性 RND 外排泵CzcCBA 双因子调控系统czcRS Heavy Metal Resistance and Its Related Mechanisms in Pseudomonas aeruginosa 1 1 2 2 1 Li Qun Yang Hongjiang Lin Shuxiang Wang Wei Ye Yujie （1. Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology ，Ministry of Education ，Tianj in K