生物工艺学第四章生物工艺过程中的无菌技术.重点分析.ppt

第在地苦末有下 目　　录 第一章　绪论 第二章　工业微生物菌种选育、制备与保藏 第三章　工业培养基及其设计 第四章　生物工艺过程中的无菌技术 第五章　生物反应动力学 第六章 发酵过程原理 第七章 生物反应器及生物工艺过程的放大 第八章 生物反应过程参数检测与控制 第九章 生物产品分离及纯化技术 第十章 生物产品工艺学及应用 第四章 生物工艺过程中的无菌技术 4.1 生物反应过程中无菌的要求 4.2 工业常用无菌技术 4.2.1 干热灭菌 4.2.2 湿热灭菌 4.2.3 射线灭菌 4.2.4 化学药剂灭菌 4.2.5 过滤除菌 4.3 培养基灭菌 4.3.1 湿热灭菌原理 4.3.2 分批灭菌 4.3.3 连续灭菌 4.4 空气除菌 4.4.1 空气除菌方法 4.4.2 空气除菌流程 4.5 设备及管道灭菌 4.1 生物反应过程中无菌的要求 4.2 工业常用无菌技术 干热灭菌时，微生物主要由于氧化作用而死亡。最常用的方法有以下两种： (1)灼烧法。常用于实验室接种针、勺、试管或三角瓶口和棉塞的灭菌，也用于工业发酵罐接种时的火环保护。 (2)烘箱热空气法。将物品放入烘箱内，然后升温至165℃，维持2小时。经过烘箱热空气法可以达到彻底灭菌的目的。该法适用于玻璃、陶瓷和金属物品的灭菌。其优点是灭菌后物品干燥，缺点是操作所需时间长，易损坏物品，对液体样品不适用。 利用饱和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌。通常湿热灭菌条件为121℃，维持30 min。 高压蒸汽灭菌是实验室、发酵工业生产中最常用的灭菌方法。一般培养基、玻璃器皿、无菌水、缓冲液、金属用具等都可以采用此法灭菌。 射线灭菌是利用紫外线、高能电磁波或放射性物质产生的高能粒子进行灭菌的方法，其中以紫外线最常用。其杀菌作用主要是因为导致DNA胸腺嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体和胞嘧啶水合物，抑制DNA正常复制。此外，空气在紫外线辐射下产生的臭氧有一定杀菌作用。 某些化学试剂能与微生物发生反应而具有杀菌作用。常用的化学药剂有酒精、甲醛、漂白粉(或次氯酸钠)、高锰酸钾、环氧乙烷、季铵盐等。由于化学药剂也会与培养基中的一些成分作用，且加入培养基后易残留在培养基内，所以，化学药剂不能用于培养基的灭菌，一般应用于发酵工厂环境的消毒。 过滤除菌是利用过滤法阻留微生物以达到除菌的目的。此法仅适用于不耐高温的液体培养基组分和空气的过滤除菌。工业上常用过滤法大量制备无菌空气，供好氧微生物的液体深层发酵使用。 4.3培养基灭菌 4.3.1.1 微生物热阻 4.3.3.1 连消塔—喷淋冷却流程 4.3.3.1 连消塔—喷淋冷却流程 4.4 空气除菌 4.4.1.1 热杀菌 4.4.2.1 两极冷却、加热除菌流程 4.4.2.2冷热空气直接混合式空气除菌流程 4.4.2.3 高效前置过滤空气除菌流程 4.4.2.4 利用热空气加热冷空气的流程 它利用压缩后热空气和冷却后的冷空气进行交换，使冷空气的温度升高，降低相对湿度。 特点：对热能利用比较合理，热交换还可以兼做贮气罐，但由于气-气交换的传热系数很小，加热面积要足够大才能满足要求。 4.5 设备及管道灭菌 4.5 设备及管道灭菌 4.5 设备及管道灭菌 连续灭菌优势： 1、高温快速灭菌，对培养基成分破坏少； 2、耐热性物料和热敏性物料可在不同温度下分开灭菌；碳源和氮源可分开灭菌，以免醛基和氨基发生反应生成有害物。 需注意： 1、黏度高或固体成分多的培养基连续灭菌，必须避免管道过长，或尽可能将淀粉质原料先液化。 2、采用连续灭菌时，发酵罐应提前空消，加热器、维持罐及冷却器也应先灭菌。 4.4.1 空气除菌方法 4.4.2 空气除菌流程 空气除菌就是除去或杀灭空气中的微生物，可使用介质过滤、辐射、化学药品、加热、静电吸附等方法。其中，介质过滤和静电吸附方法是利用分离过程把微生物粒子除去，其余的方法是使微生物蛋白质变性失活。 热杀菌是一种有效的、可靠的方法。 采用蒸汽或电加热空气； 利用空气被压缩时产生的热量进行加热保温杀菌，并安装分过滤器将空气进一步过滤，然后再进入发酵罐。 X-射线、β-射线、紫外线、超声波、γ-射线等从理论上都能破坏蛋白质活性而起杀菌作用。 但应用较广泛的还是紫外线，它的波长在253.72～256 nm时杀菌效力最强，它的杀菌力与紫外线的强度成正比，与距离的平方成反比。紫外线通常用于超净台、无菌室和医院手术室等空气对流不大的环境消毒杀菌。但杀菌效率低，杀菌时间长，一般要结合甲醛或苯酚喷雾等来保证无菌室的高度无菌。 4.4.1.2辐射杀菌 4.4.1.