生物化学第一章药糖化学解析.pptVIP

* （三）多糖的降解 制备低聚糖 1.化学降解法：常用亚硝酸控制降解法。污染 2.酶法降解：特异性强。 产量低，成本高 3.辐射降解法：使分子电离或激发，分子间形成化学键－辐射交联，导致分子链断裂－辐射降解。 四、多糖理化性质测定 （一）多糖的含量测定：方法多种 硫酸蒽酮法，硫酸苯酚法 （己糖基、戊醛糖、己糖醛酸） 硫酸卡唑法（糖醛酸） 乙酰丙酮显色法（氨基葡萄糖） （二）多糖纯度测定 1.电泳法（高压电泳） 2.凝胶柱层析法：呈现一个峰为标准 3.紫外扫描法：多糖200nm。纯度 4.其它方法：特殊基团，纸层析等 * （三）多糖分子量测定（物理方法） 1.凝胶柱层析法： 已知分子量的多糖作标准 2.特性黏度法 相似结构多糖决定K值，测出粘数，计算分子量。 性质分析：比旋度测定、溶解度测定。 五、多糖的结构分析 复杂（结构与种类多有关），但迄今无一种方法可单独完成结构分析，需结合应用。 物理方法： 红外光谱、核磁共振谱、质谱、X－射线衍射； 化学降解法、酶解法、免疫化学法和放射免疫法 （一）多糖组成成分的分析 了解何种单糖组成及之间的比例 以片段为单位分析。 1.酸水解（完全酸水解，部分酸水解） 1~3mol/L硫酸或2mol/L三氟乙酸，80~100Co密闭加热6~8小时完全水解得到单糖；0 Co或室温下水解得到较低分子量的寡聚糖。 水解产物用层析法（纸层析、薄层层析、气相层析）鉴定。 水解测出多糖中单糖的组成，并计算各单糖成分间分子比。 2.乙酰解 乙酐：乙酸：水（10:10:1)混合液中加热，使一定的糖苷键处断裂。 （为酸水解的补充，特异水解1→6糖苷键） 生成乙酰化单糖和乙酰化寡糖。 用层析法鉴定，从另一角度获得糖链结构信息。 3.甲醇解 多糖链80~100Co与无水甲醇氯化氢反应，使糖链变成单糖的甲基糖苷。将其转化为三甲基硅醚衍生物或乙酰基衍生物，气相层析分子（与标准对照），可得到多糖中单糖成分的定量数据 （二）多糖结构的甲基化分析 为结构分析最有力的手段之一 1.部分甲基化的糖醇乙酰衍生物产生： 单糖（多糖中） （－OH全部生成甲醚） （甲基化试剂）游离羟基生成甲醚，水解、释放 （Hakomori法） 甲基化单糖 硼氢化钠还原 糖醇 乙酰化 部分甲基化的糖醇乙酰衍生物（气相色谱－质谱分析） 阐明单糖种类和比例，及连接方式（键型，糖苷键位置）。 （三）多糖结构的过碘酸氧化及Smith降解 过碘酸氧化反应： 一种选择性的氧化降解反应，作用于多糖分子中1,2二羟基和1,2,3-三羟基生成相应的醛或甲醛、甲酸。 定量反应：高碘酸的消耗与甲醛甲酸的生成，判断糖苷键位置，直链多糖的缔合度、支链多糖的分支数目等。 1,2-糖苷键 1,3糖苷键 1,4糖苷键 1,6糖苷键 高碘酸 ＋＋ － ＋＋ ＋＋ 过程 产物 氧化后 硼氢化钠（钾）还原 生成多羟基化合物 HCl稀水解 甘油 甘油醛 还原 水解 原单糖 氧化 还原 水解 赤藓糖 乙醇醛 氧化 还原 水解 甘油 乙醇醛 Smith降解： 将过碘酸氧化产物进行还原，进行酸水解或部分酸水解。（改良过碘酸氧化） （室温下用稀无机酸水解还原产物） 结果得到具有特征性的糖链的重复单元，获取多糖结构信息。 （四）多糖结构的酶降解测定法 不同性质的糖苷酶或称多糖酶能作用于不同性质的糖苷键，通过顺序降解，阐明多糖链的一级结构。酶的来源不同，作用有差异。 糖苷酶：外切糖苷酶，内切糖苷酶 * 1.外切糖苷酶：只能切下多糖非还原末端的一个单糖。对单糖组成和糖苷键有专一性。 (1) β-D-半乳糖苷酶( β-D-galactosidase） (2) α-D-半乳糖苷酶( α -D-galactosidase） (3) β-D-甘露糖苷酶(β-D-mannosidase） (4) α -D-甘露糖苷酶(α-D mannosidase) (5) α-L-岩藻糖苷酶（α-L-fucos