生物工艺学要点解析.doc

1、固定化增殖细胞：将活细胞固定在载体上并使其在连续反应过程中保持旺盛色生长繁殖能力的一种固定化方法。 2、基因工程菌：是指以微生物为操作对象，通过基因工程技术获得的表达外源基因或过量表达或抑制表达自身基因的工程生物，包括细菌、放线菌等原核细胞微生物和酵母、丝状真菌等真核细胞微生物。有时也把基因工程茵称为重组菌。 3、生物反应器：利用酶或生物体（如微生物，细胞）所具有的生物功能，在体外进行生化反应的装置系统，是一种生物功能模拟机，如发酵罐，固定化酶或固定化细胞反应器等。 4、生物质产业：是指利用可再生或循环的有机质，包括农作物、树木和其他植物及其残体，还有畜禽粪便，有机废弃物，以及利用边缘性土地种植能源植物为原料，利用它们进行生物产品，生物燃料和生物能源生产的产业。 1、如何对基因工程菌发酵工厂进行防护？ 接种 机械密封 取样 排气 排液 2、酒精发酵分为哪几个阶段？各有何特征？如何提高酒精发酵的产量？ 前发酵期：发酵作用不强，酒精和CO2产生少，所以发酵的表面显得比较平静，糖分消耗也比较慢，持续10h左右，温度控制在26-28℃? 主发酵期：酵母细胞数可达1亿/mL以上，由于发酵醪中的氧气已经消耗完毕，酵母菌基本停止繁殖而主要进行酒精发酵作用。醪液中糖分迅速下降，酒精逐渐增多，产生大量CO2，产生很强的CO2泡沫响声，醪液温度迅速上升，生产控制温度在30-34℃。主发酵时间一般在12h左右? 后发酵期：发酵作用减弱，产生热量减少，发酵醪的温度逐渐下降，醪液温度控制在30-32℃左右。? 产量的提高：（1）在发酵前期，创造条件让酵母继续繁殖到一定数量，使糖化醪中的淀粉和糊精继续被分解，生成发酵的糖分。 （2）在发酵过程中期后期，创造厌氧条件，使酵母在无氧条件下将糖分发酵成酒精。（3）发酵过程中产生的CO2应设法排除，加强CO2排除时被带走的酒精的捕集回收。 3、生物工艺发展经历了哪几个阶段？分别举例说明。 答：①古老的生物技术产品??食品/食物：制酱、酿醋、做豆腐?天花/疫苗：痘衣法、痘浆法、旱苗法?②初期的生物技术产品：1680年观察到微生物；19世纪60年代建立了纯培养技术；1897年发现酶；19世纪末出现发酵工业，酒精，乳酸，淀粉酶，蛋白酶等，多为出击代谢产物，厌氧发酵?③近代生物技术产品④现代生物技术产品? 例?1975年英国的Kohler及Milstein发明了杂交瘤技术，他们利用淋巴细胞与骨髓瘤细胞用原生质体融合技术进行细胞融合而获得在体外培养能产生单一抗体的杂交细胞。??标志性技术：?基因重组，细胞融合，固定化，细胞培养 4、如何从自然界分离获得目标菌株？ 取样 增殖培养 纯种分离 筛选 生产性能的测定 毒性实验 自然界分离新菌种包括四个步骤：采样、增殖培养、纯种分离和性能测定。??? 1采样：a.根据筛选目的，确定采样地点。b.取离地面5~15cm处的土壤几十克，放入消毒好的袋中记录采样时间、地点、环境情况等，酶母菌和霉菌在腐殖质含量高的土壤中取。?? 2增殖培养：如样品中含目标菌较少，应进行增殖（富集）培养，即给混合菌群提供有利于目标菌株生长或不利于其他菌型生长的条件，促使目标菌大量繁殖，便于分离它们。?a.控制碳源，生长因子、盐等?b.控制PH??c.添加抑制剂??d.控制温度? 3纯种分离：增殖培养后还含有杂菌，需进行纯种分离，才能获得纯种，一般是采用单菌落分离法。???a.平板划线法?????b.菌液稀释法??????为避免孢子之间的粘连和吻合，可进行液体培养，玻璃珠，石英砂振荡，或加入0.05%的分散剂?? 4生产性能的测定?：a.初筛：进行一些定性或半定量测定???b.复筛：初步进行工艺条件摸索?????c.终试验：选出较优菌株1~3株，进行进一步生产性能试验和毒性试验等? 5毒性试验：自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的，将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品工业有关的菌种，更应慎重。据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。 5、抗生素生产中为什么要采用亚适量的磷酸盐浓度？ 6、为什么可以通过测定排气中CO2释放率来控制补糖的速率？ 发酵液中补加葡萄糖，即增加碳源，排气co2浓度增加，pH值下降。随着糖耗的增加，?CRR(co2释放量)增加。原因是葡萄糖被菌利用产生co2，其中溶解的co2使培养液pH值下降；此外葡萄糖被菌利用产生有机酸，使pH下降。? 糖、CO2、pH三者的相关性，被青雷素工业生产上用于补料控制的参数，并认为排气二氧化碳的变化比PH值变化更为敏感，所以通过测定排气CO2释放率来控制补糖速率。 7、在实际生产中，为什么可以根据pH值、尾气中CO2含量和溶解氧等参数的