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第9章 酶促反应动力学 底物浓度对酶反应速率的影响 米氏方程 酶的抑制作用 环境因素对酶反应的影响 1 底物浓度对酶反应速率的影响 1.1米氏学说的提出 ① 酶有被底物所饱和的现象 ② 酶-底物复合物学说(Enzyme-substrate complex) 1903年，Herin-Wurtz ③ 快速平衡学说 1913年Michaelis和Menten 提出米氏方程 Ks为ES的解离常数 ④ 稳态理论（Steady State ） Briggs and Haldane in 1925 1.2 米氏方程式的推导 酶促反应分两步进行： 第一步：酶与底物作用，形成酶-底物复合物。 第二步：ES复合物分解形成产物，释放出游离酶。 酶与底物生成ES的速度为： 当整个反应体系处于稳态时，[ES]生成速度（V1）等于ES分解速度（V2）： 将（2）代入（1） 将（4）代入（3） 当反应体系中的底物浓度极大，而使所有的酶分子都以ES形式存在时，反应速度达到最大值（即最大反应速度，V）。 米氏方程式 Km--米氏常数（Michaelis-Menton constant） 表明当已知Km和Vmax时，酶反应速率与底物浓度的定量关系。 Km的物理意义 Km值是当酶反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 单位是底物浓度的单位，一般用mol/L或mmol／L表示。 计算：底物浓度—反应速度 底物浓度较低时， [S]《 Km，米氏方程式的分母中[S]一项可以忽略不计，得： 反应速度与底物浓度成正比， 符合一级反应。 在底物浓度很高时，[S]》Km，米氏方程中，Km可以忽略不计，得 反应速度与底物浓度无关， 符合零级反应——测定酶活力 1.3米氏常数的意义 ① Km是酶的一个特征常数。 Km的大小只与酶的性质有关，而与酶浓度无关。 鉴别酶：25℃，最适pH的Km值 ② Km可以判断酶的专一性和天然底物。 酶的最适底物或天然底物： Km值最小的底物 酶对底物亲和力的大小：1/ Km 最适底物的亲和力（1/ Km）最大， Km最小,达最大反应速率一半时所需要的底物浓度愈小。 1.4 米氏常数的求法 双倒数作图法（Lineweaver-Burk作图法） 以1／[S]为横坐标， 以1／v为纵坐标作图 缺点： 实验点过于集中于直线的左端， 作图不易十分准确。 2 酶的抑制作用 2.1 抑制作用 失活作用（inactivation）：酶蛋白变性而引起活力丧失。 变性剂对酶无选择性。 抑制作用（inhibition）：酶的必须基团化学性质的改变，引起酶活力降低或丧失。但酶未变性。 一种抑制剂只能使一种酶或一类酶产生抑制作用。 不可逆的抑制作用（irreversible inhibition）： 抑制剂与酶的必须基团以共价键结合而引起酶活力丧失，不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。 可逆的抑制作用（reversible inhibition） ： 抑制剂与酶的必须基团以非共价键结合而引起酶活力丧失，能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。 可逆的抑制作用： 竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制。 2.3 竞争性抑制作用（competitive inhibition) ① 概念：抑制剂与底物竞争酶的结合部位，从而影响了底物与酶的正常结合。 最常见的一种可逆抑制作用。 ② 原因： 抑制剂与底物的结构类似，与酶可形成可逆的复合物，但此复合物不可能分解成产物，酶反应速率下降。 增加底物浓度可解除这种抑制。 ③ 竞争性抑制的特征 a 反应式： 　　 b动力学方面 : Vmax不变，但Km增大 。 ④ 竞争性抑制的临床应用意义 磺胺类药物：对氨基苯磺酰胺 磺胺类药物有抑制细菌生长繁殖的作用，而不伤害人和畜禽。 叶酸和二氢叶酸是四氢叶酸的前体。（二氢叶酸合成酶） 2.4