酶的生物合成与发酵生产分析报告.ppt

RNA链的延伸图解 蛋白质的合成过程 （大肠杆菌） 肽链的后期加工 去除甲酰甲硫氨酸上的甲酰基 去除信号肽 磷酸化，形成二硫键 酶原，去除部分多肽 诱导物：既可以是酶的底物，也可以是底物的结构类似物，或底物的前体物质。 半乳糖苷酶 诱导物：乳糖，IPTG 同时诱导：几乎同时诱导几种酶的合成 顺序诱导：依次合成分解各中间代谢物的酶 2. 阻遏 (repression) 能阻碍酶生物合成的现象称为阻遏 分解代谢物阻遏(catabolite repression) 反馈阻遏(feedback repression) 分解代谢物阻遏 指细胞内同时有两种分解底物（碳源或氮源）存在时，利用快的那种分解底物会阻遏利用慢的底物的有关酶合成的现象。 分解代谢物的阻遏作用，并非由于快速利用的甲碳源本身直接作用的结果，而是通过甲碳源（或氮源等）在其分解过程中所产生的中间代谢物所引起的阻遏作用。 分解代谢物阻遏现象： 实验：细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基上生长，优先利用葡萄糖。待葡萄糖耗尽后才开始利用乳糖，产生了两个对数生长期中间隔开一个生长延滞期的“二次生长现象”(diauxie或biphasic growth）。 （二）基因调控理论  Jacob and Monod的操纵子学说（operon theory） 　 调节基因(regulator gene)：常位于调控区的上游，可产生一种组成型调节蛋白(regulatory protein) 调节蛋白是一类变构蛋白，有两个结合位点：①操纵基因；②效应物。 分为两种：1）阻遏物，没有诱导物时与操纵基因结合 2）阻遏物蛋白，只有在辅阻遏物存在时才与操纵基因结合 酶的诱导和阻遏操纵子模型 分解代谢物阻遏 2. 降低阻遏物浓度 分解代谢物阻遏 1）尽量使用非阻遏性碳源（甘油，甘露糖） 2）采取流加方式限制阻遏性碳源 反馈阻遏 1）从培养基中去除终产物 2）添加阻止末端产物的抑制剂 3. 促进分泌 表面活性剂，增加细胞通透性 4. 添加产酶催进剂 植酸钙镁，聚乙烯醇，醋酸钠 第二节 酶发酵动力学 一、细胞生长动力学 在分批培养(batch culture)过程中，细胞生长一般要经历延迟期、指数生长期、减速期、静止期和衰亡期5个阶段。 营养物浓度（生长限制基质浓度）和生长速率之间的动力学关系：Monod模型 μ:比生长速率（1/h） （specific growth rate） μmax：最大比生长速率（1/h） S：营养物浓度（生长限制基质浓度） 克/L Ks：莫诺德常数或饱和常数或营养物利用常数 克/L，或 mol/L 第三节 酶发酵生产的工艺控制 根据细胞培养方式的不同，酶发酵生产可以分为： 固体培养发酵 设备简单，操作方便，劳动强度大，规模小。 液体深层发酵 酶发酵主要生产方式，机械化强度高，易管理，规模大。 固定化细胞发酵 固定在水不溶性载体上而能进行正常生命活动的细胞。细胞流失少，连续发酵；菌体含量少，易于分离。 培养基 碳源： 无机碳源：碳酸钠，二氧化碳 有机碳源：葡萄糖、蔗糖、淀粉 考虑因素： （1）碳源对酶生物合成的调节作用 （2）原料的供应和价格 氮源 构成细胞的蛋白质、核酸以及含氮代谢物 有机氮：蛋白质及其水解物、蛋白胨、酵母膏等 无机氮：硫酸铵、硝酸铵 注意： （1）氮源被同化后会改变pH （2）C/N对酶的产量有显著影响 无机盐 提供细胞生命活动不可缺少的无机元素，对培养基的pH、氧化还原电位和渗透压调节起重要作用。 细胞组分，酶组分 大量元素：10-3-10-4 mol/L，磷、硫、钾 微量元素： 10-6-10-8 mol/L，铜、锰、锌 生长因子 对微生物正常代谢必不可少且不能用简单的碳源或氮源自行合成的有机物。 广义的生长因子除了维生素外，还包括氨基酸，嘌呤，嘧啶，激素；而狭义的生长因子一般仅指维生素。 各种微生物与生长因子的关系可分以下几类： （1）生长因子自养型微生物（auxoautotrophs） 多数真菌、放线菌 和不少细菌，如E．coli（大肠杆菌）等都是不需要外界提供生长因子。 （2）生长因子异养型微生物（auxoheterotrophs） 它们需要多种生长因子。如乳酸细菌、原生动物和支原体等。例如，一般的乳酸菌都需要多种维生素；Haemophilusinfluenzae（流感嗜血杆菌）需要卟啉及其衍生物作为其生长因子；支原体常需要甾醇；Haemophilusparahaem