2-2核酸及理化性质分析.ppt

第二章 生物大分子的性质 2. 核酸及其性质 核酸是存在于细胞中的一类大分子酸性物质，包括核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）两大类。 RNA和DNA都是以单核苷酸为基本单位所组成的多核苷酸长链。 RNA主要参与遗传信息的表达，而DNA则是遗传信息的载体。 脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid- DNA），是遗传信息的载体，负责遗传信息的贮存和发布。 二、核酸的生物学功能 ?DNA的基本功能是作为遗传信息的载体，为生物遗传信息复制以及基因信息的转录提供模板。 DNA分子中具有特定生物学功能的片段称为基因（gene）。一个生物体的全部DNA序列称为基因组（genome）。基因组的大小与生物的复杂性有关，如病毒SV40的基因组大小为5.1×103bp，大肠杆菌为5.7×106bp，人为3×109bp。 第二节：核酸的化学组成 二 核酸的分子组成 核酸（DNA和RNA）是一种线性多聚核苷酸，它的基本结构单元是核苷酸。 核苷酸本身由核苷和磷酸组成。 而核苷则由戊糖和碱基形成 所以， 核酸 3．核苷酸的生物学作用 （1）参与DNA、RNA的合成、蛋白质的合成、糖与磷脂的合成。 （2）在能量转化中起重要作用，ATP是生物体内能量的通用货币。 （3）是构成多种辅酶的成分：NAD、NADP、FAD、FMN和CoA。 （4）参与细胞中的代谢与调节（cAMP、cGMP）。 一、核酸的一般物理性质 DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末状固体，都微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂。（用乙醇、氯仿从溶液中沉淀核酸） DNA和RNA在细胞中常以核蛋白形式存在，两种核蛋白在盐溶液中的溶解度不同。 DNA核蛋白 RNA核蛋白 0.14mol/LNaCl - + 1-2mol/LNaCl + - 二、核酸的两性性质及等电点 与蛋白质相似，核酸分子中既含有酸性基团（磷酸基）也含有弱碱性基团（碱基），因而核酸也具有两性性质。 三、核酸的水解 1.核酸的酸解和碱解 核酸分子中的磷酸二酯键可在酸或碱性条件下水解切断（降解）。 酸对核酸的作用因酸的浓度、温度和作用时间不同而不同。嘌呤碱基比嘧啶碱基易被水解下来。 2、核酸的酶解 生物体内存在多种核酸水解酶。这些酶可以催化水解多聚核苷酸链中的磷酸二酯键。 以DNA为底物的DNA水解酶（DNases） 以RNA为底物的RNA水解酶（RNases） 四、核酸的紫外吸收 在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，因而具有独特的紫外线吸收光谱，一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组分定性和定量测定的依据。 1、DNA的变性 在理化因素作用下，DNA双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链，从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变，这种现象称为DNA的变性。 引起DNA变性的因素主要有：①高温，②强酸强碱，③有机溶剂等。 DNA变性后的性质改变： ①增色效应：指DNA变性后对260nm紫外光的光吸收度增加的现象； ②旋光性下降； ③粘度降低； 浮力密度增大； 分子量不变； ④生物学功能丧失或改变。 2.RNA变性 RNA本身只有局部的双螺旋区，所以变性行为所引起的性质变化没有DNA那样明显。 利用紫外吸收的变化，可以检测核酸变性的情况。 因为天然状态的DNA在完全变性后，紫外吸收(260 nm)值增加25－40%.而RNA变性后，约增加1.1%。 3.DNA的热变性和解链温度（Tm） 用加热的方法使DNA变性叫做热变性。 DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常将DNA的变性达到50%时，即增色效应达到一半时的温度称为DNA的解链温度（melting temperature,Tm）,Tm也称熔解温度或DNA的熔点。 一般DNA的Tm值在70-85?C之间 DNA的变性温度：加热DNA溶液，使其对260nm紫外光的吸收度突然增加，达到其最大值一半时的温度，就是DNA的变性温度（融解温度，Tm）。 Tm的高低与DNA分子中G+C的含量有关，G+C的含量越高，则Tm越高。 G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G、 C含量，可通过经验公式计算： （G+C)%=(Tm-69.3)X2.44 DNA变性 4、核酸的复性 变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。DNA复性后，一系列物理、化学性质将得到恢复。DNA复性的程度、速