唐文芝基因工程分析报告.ppt

基因工程 宿州二中 唐文芝 抗虫害的玉米 常用的运载体：质粒、噬菌体和动植物病毒 练习题．科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。过程如右图据图回答： (1)人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是________________________________ __________________________________。(2)过程(1)表示的是采取___________的方法来获取目的基因。(3)图中(3)过程用人工方法，使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴细菌或病毒_____细胞的途径。一般将受体大肠杆菌用________处理，使细胞处于能吸收周围环境中的DNA分子的生理状态，这种细胞称为_________细胞，再将___________溶于缓冲液中与该种细胞混合，在一定的温度下完成转化。(4)大肠杆菌B可能导入了质粒或重组质粒，也可能没有质粒导入其中。筛选出含质粒或重组质粒细菌可采用的方法________________________________________________________________________________________， 理由是：________________。 (5)如果把已经导入了普通质粒A或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，发生的现象是______________________原因是：___________________________________________________________________________________________________________。 （6）那我们怎么获得导入了重组质粒的大肠杆菌呢？ 再见 * * 能发荧光的热带斑马鱼 普通热带斑马鱼是不发荧光的 能产生人的胰岛素的大肠杆菌 例如： EcoRⅠ C T T A A G 黏性末端 A A T T C G 黏性末端 基因的运输工具——运载体 标记基因，便于进行检测。 基因组DNA文库 cDNA文库 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 结构基因 外显子 内含子 转录、加工修饰 mRNA PCR过程： 变性、退火、延伸三步曲 高温变性：加热至90～95℃双链DNA解链成为单链DNA 低温退火(复性)：冷却至55～60℃部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合 中温延伸：加热至70～75℃以目的基因为模板，合成互补的新DNA链 变性 退火 延伸 基因表达载体的组成： a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 调节基 因 操纵基 因 结构基因 RNA聚合酶 半乳糖苷酶 酶 酶 RNA聚合酶 启动子 RNA聚合酶 启动子：位于基因首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度； 基因工程产品与天然产品的活性比较，以确定功能是否相同等。 个 体 水 平 鉴 定 是否成功显示出杂交带 抗原—抗体杂交 目的基因是否翻译出蛋白质 第三步 是否成功显示出杂交带 分子杂交技术 （DNA和mRNA之间） 目的基因是否转录出mRNA 第二步 是否成功显示出杂交带 DNA分子杂交 （DNA和DNA之间） 目的基因是否进入受体细胞 第一步 分 子 检 测 结果显示 方法 检测内容 步骤 类型 目的基因的表达和检测 人的基因与大肠杆菌DNA的组成成分相同，结构相同，并且具有相同的黏性末端 反转录法 侵染? ?Ca2+???? ?感受态? 基因表达载体 将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养上，能够生长的，说明已导入了质粒A或重组质粒，反之则没有导入 ?因为普通质粒A和重组质粒上都有抗氨苄青霉素基因 有的能生长，有的不能生长 导入普通质粒A的细菌能生长，因为普通质粒A上有四环素抗性基因 导入重组质粒的细菌不能生长，因为目的基因正插在四环素抗性基因中，破坏了其结构和功能。 * *