细胞工程与单克隆抗体制备介绍.doc

细胞工程与单克隆抗体制备 一、植物组织培养 1、操作流程： 2、组织培养的条件 （1）离体、无菌。 （2）环境条件适宜：如营养物质(如水、无机盐、蔗糖、维生素等)、激素(如生长素和细胞分裂素)、适宜的温度和光照等。 易错警示：植物组织培养的4个易错点 （1）幼嫩的组织脱分化较为容易，如茎尖、根尖、形成层细胞易脱分化，而植物的茎、叶和成熟的组织则较难。 （2）不同细胞的全能性不同，具体表现为：受精卵生殖细胞体细胞，离体细胞的全能性表达与分化程度呈负相关，但生殖细胞特殊。 （3）脱分化形成愈伤组织的过程不需要光，再分化过程需要光。 （4）植物组织培养中不同培养阶段培养基含有的激素不同，因为培养的目的不同(生根或生芽)。 3、脱分化和再分化的比较 比较内容 脱分化 再分化 过程 外植体→愈伤组织 愈伤组织→幼苗 形成体特点 排列疏松、高度液泡化的薄壁细胞 有根、芽 需要条件 a.离体 b.适宜的营养 c.生长素/细胞分裂素的比例适中 d.不需光 a.离体 b.适宜的营养 c.生长素/细胞分裂素的比例高或低诱导生根或生芽 d.光照 4、植物激素在组织培养中的作用 （1）按照不同的顺序使用，会得到不同的实验结果。 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但细胞不分化 先使用细胞分裂素，后使用生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 （2）当同时使用时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。 生长素与细胞分裂素的用量比值 植物细胞的发育方向 比值高 有利于根的分化、抑制芽的形成 比值低 有利于芽的分化、抑制根的形成 比值适中 促进愈伤组织的形成 二、植物体细胞杂交技术 1、操作流程 （1）过程为去除细胞壁获得具有活力的原生质体，常用方法是酶解法，所用到的酶是纤维素酶和果胶酶。 （2）过程是原生质体的融合，人工诱导的物理法包括离心、振动、电激等；化学法一般用聚乙二醇(PEG)作诱导剂。 （3）过程是原生质体融合后再生出细胞壁，这是原生质体融合成功的标志。 （4）植物体细胞杂交的意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。 2、易错警示：植物细胞工程的2个易错点 （1）对植物体细胞杂交和有性杂交辨析不清 　　植物体细胞杂交：若两个不同品种的植物细胞A、B进行融合，A含有2X条染色体，2个染色体组，基因型为Aabb；B含有2Y条染色体，2个染色体组，其基因型为ccDd，则新植株应为四倍体，其体细胞染色体数为2X＋2Y，基因型为AabbccDd。 　　植物有性杂交的结果：子代细胞中染色体数、基因型分别为“X＋Y”、“AbcD”或“abcD”或“Abcd”或“abcd”，新植株为异源二倍体。 （2）利用植物组织培养生产细胞产物时，有时只需将外植体培养到愈伤组织，从愈伤组织中获取产物。 三、动物细胞培养 1、操作流程 2、动物细胞培养的条件 （1）无菌、无毒：对培养液和所用培养用具无菌处理，添加抗生素，定期更换培养液以清除代谢产物。 （2）营养：除正常的有机和无机营养外，加入血清、血浆。 （3）适宜的温度和pH：温度为36.5±0.5(哺乳动物)，pH为7.2～7.4。 （4）气体环境：含95%的空气加5% CO2的混合气体。 易错警示：动植物细胞培养及动物体细胞核移植的易错点 （1）区分原代培养和传代培养的关键是是否分瓶培养。贴壁生长到一定程度需要用胰蛋白酶处理，然后再分瓶培养，原代培养结束，开始了传代培养。 （2）经植物组织培养成的植株与提供外植体的植株完全相同，而动物细胞核移植形成的个体与供体大部分性状相同，也有部分性状与受体相同。 （3）核移植过程中供体理论上是提供细胞核，但操作过程中可以把整个体细胞注入去核的卵母细胞中去，原因是体细胞体积相对较小，取核难度较大，另外细胞膜对核融合的障碍性较小。 3、植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较 ? 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性 过程 相关酶 纤维素酶和果胶酶 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 融合方法 物理法：离心、电激、振动； 化学法：聚乙二醇等试剂诱导 除物理法和化学法外，还可用灭活的病毒诱导 结果 杂种植株 杂交细胞 意义 克服了远缘杂交的不亲和性，获得杂种植株 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能 四、单克隆抗体 1、单克隆抗体的制备过程 2、单克隆抗体制备过程中的两次筛选 第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞(A为浆细胞，B为骨髓瘤细胞)，不需要A、B、AA、BB型细胞。 第二次筛选：利用多孔板法和抗原—抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。 ? 典型例题剖析 1、下列有关植物组织培养的叙述，正确的是（　　） A．愈伤组织是一团有特定结构和