Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞与淋巴母细胞.docVIP

Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞 percoll连续梯度怎么配制？比如15%---75%的percoll连续梯度?答：根据你需要的具体密度梯度决定的，根据要分离的不同细胞种类，数量等等，也有用原液配的。也有用80％配的，不一定的。另外，percoll本身是低渗透压的，要用高渗透压溶液配成生理等渗透压溶液，然后使用，不然，细胞容易破裂。一般是先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。即取Percoll原液与10倍浓缩的PBS以9：1的比例混合，此时溶液 为100％ Percoll，比重是1.127，毫克分子渗透压浓度为290mOsmol/kg Percoll浓度(％) ?70??? ?60 ?????50 ?????40 ?????30 ??????20 比重g／ml ?????1.090? 1.077 ???1.067? ?1.056 ??1.043 ???1.031 Percoll是经过聚乙烯吡咯烷酮 (polyvinyl pyrolidone, PVP) 处理的硅胶颗粒混悬液，对细胞无毒性和刺激性。Percoll混悬液的硅胶颗粒大小不一，经过高速离心后，可形成一个连续密度梯度，将比重不同的细胞分离纯化。 　　将1份10XPBS