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DNA复制所有资料
中文名称:
DNA 复制
英文名称:
DNA replication
定义1:
从亲代DNA合成子代DNA的过程。根据沃森-克里克提出的DNA双螺旋模型和DNA的复制机制:亲代DNA的两条链解开,每条链作为新链的模板,从而形成两个子代DNA分子,其中每一个子代DNA分子包含一条亲代链和一条新合成的链。
DNA复制主要包括引发、延伸、终止三个阶段。
引发
复制的引发(Priming)阶段包括DNA复制起点双链解开,通过转录激活步骤合成RNA分子, HYPERLINK /view/1156604.htm \t _blank RNA引物的
HYPERLINK /image/d5462bfa021991be9f514629 \o 查看图片 \t _blank ??
DNA复制
合成, HYPERLINK /view/29676.htm \t _blank DNA聚合酶将第一个脱氧核苷酸加到引物RNA的3-OH末端复制引发的关键步骤就是 HYPERLINK /view/29583.htm \t _blank 前导链DNA的合成,一旦前导链DNA的聚合作用开始,滞后链上的DNA合成也随着开始,在所有前导链开始聚合之前有一必需的步骤就是由RNA聚合酶(不是引物酶)沿滞后链模板转录一短的RNA分子。
在有些DNA复制中,(如质粒ColE),该RNA分子经过加式成为DNA复制的引物。但是,在大部分DNA复制中,该RNA分子没有引物作用。它的作用似乎只是分开两条DNA链,暴露出某些特定序列以便 HYPERLINK /view/390443.htm \t _blank 引发体与之结合,在前导链模板DNA上开始合成RNA引物,这个过程称为转录激活(transcriptional activation)。
在前导链的复制引发过程中还需要其他一些蛋白质,如大肠杆菌的dnaA蛋白。这两种蛋白质可以和复制起点处DNA上高度保守的4个9bp长的序列结合,其具体功能尚不清楚。可能是这些蛋白质与DNA复制起点结合后能促进DNA聚合酶Ⅲ复合体的七种蛋白质在复制起点处装配成有功能的全酶。
DNA复制开始时,DNA HYPERLINK /view/1866970.htm \t _blank 螺旋酶首先在复制起点处将双链DNA解开,通过转录激活合成的RNA分子也起分离两条DNA链的作用,然后 HYPERLINK /view/782797.htm \t _blank 单链DNA结合蛋白质结合在被解开的链上。
由复制因子X(n蛋白),复制因子Y(n蛋白),n蛋白,i蛋白,dnaB蛋白和dnaC蛋白等6种蛋白质组成的 HYPERLINK /view/2512266.htm \t _blank 引发前体(preprimosome),在单链DNA结合蛋白的作用下与单链DNA结合生成中间物,这是一种前引发过程。引发前体进一步与引物酶(primase)组装成引发体(primosome)。
引发体可以在单链DNA上移动,在dnaB亚基的作用下识别DNA复制起点位置。
首先在前导链上由引物酶催化合成一段RNA引物,然后,引发体在滞后链上沿5→3方向不停的移动(这是一种相对移动,也可能是滞后链模板在移动,见后),在一定距离上反复合成RNA引物供DNA聚合酶Ⅲ合成 HYPERLINK /view/15889.htm \t _blank 冈崎片段使用,引发体中许多蛋白因子的功能尚不清楚。但是,这些成份必须协同工作才能使引发体在滞后链上移动,识别合适的引物合成位置,并将核苷酸在引发位置上聚合成RNA引物。由于引发体在滞后链模板上的移动方向与其合成引物的方向相反,所以在滞后链上所合成的RNA引物非常短,一般只有3-5个核苷酸长。而且,在同一种生物体细胞中这些引物都具有相似的序列,表明引物酶要在DNA滞后链模板上比较特定的位置(序列)上才能合成RNA引物。
为什么需要有RNA引物来引发DNA复制呢?这可能尽量减少DNA复制起始处的突变有关。DNA复制开始处的几个核苷酸最容易出现差错,因此,用RNA引物即使出现差错最后也要被DNA聚合酶Ⅰ切除,提高了DNA复制的准确性。RNA引物形成后,由DNA聚合酶Ⅲ催化将第一个脱氧核苷酸按碱基互补原则加在RNA引物3-OH端而进入DNA链的延伸阶段。
过程
DNA双螺旋的解旋
DNA在复制时,其双链首先解开,形成复制叉,而复制叉的形成则是由多种蛋白质及酶参与的较复杂的复制过程
(1)单链DNA结合蛋白(single—stranded DNA binding protein, ssbDNA蛋白)
ssbDNA蛋白是较牢固的结合在单链DNA上的蛋白质。
原核生物ssbDNA蛋白与DNA结合
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