甘肃省会宁县第三中学高中生物选修三课件：12基因工程的基本操作程序（修订）（共45张PPT）.pptVIP

变性 方法： DNA分子杂交技术 （2）检测目的基因是否转录出了mRNA 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 14N 14N 如果显示出杂交带，就表明待测样品目的基因已经转录。 提取 （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法：抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 证明：提取蛋白质与Bt毒素蛋白质一样 例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 2.鉴定——个体生物学水平的鉴定 抗虫、抗病结种实验，活性比较实验 1、有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶 课堂练习 A 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ 课堂练习 D 3、有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达 C 存活的大肠杆菌 培养 培养 质粒来源： 大肠杆菌 含有氨苄青霉素 的完全培养基 含有四环素的完全培养基 人工改造质粒 （选择具有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因农杆菌） 质粒 知识拓展 Hin d限制性酶ⅠⅡ Hin dIII Hin dIII 目的DNA 质粒 构建表达载体 四环素抗性基因由于目的基因插入而失活，形成只具有氨苄青霉素抗性基因 DNA连接酶 人类胰岛素的基因 * 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 1.2基因工程的基本操作程序 1.目的基因的概念 主要是指编码蛋白质基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 一、目的基因的获取 请举出三个以上的例子 2.目的基因的获取方法： （3）用化学方法直接人工合成目的基因 （1）从基因文库中获取目的基因 （2）应用PCR技术扩增目的基因 （1）从基因文库中获取目的基因 ①基因文库和部分基因文库的概念 ②基因组文库和cDNA文库的主要区别 ③怎样从基因文库中找到我们所需要的目的基因？ ①基因文库和部分基因文库的概念： 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库。 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库。如：cDNA文库。 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 4.基因文库的构建方法 限制酶 与运载体连接 导入 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接 导入 部分基因文库 （cDNA文库） 部分基因文库的建立方法（cDNA文库） mRNA 反转录酶 单链DNA 合成 双链DNA（cDNA） 载体 插入 导 入 受体菌群 （ cDNA文库） 分离 目的基因 ②基因组文库和cDNA文库的主要区别 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子（具有启动作用的DNA片段） 基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段） 基因多少 物种间的基因交流 小 大 无 有