第十三章 工业微生物菌种复壮和保藏.pptVIP

三、菌种保藏机构 （一）国内重要菌种保藏机构 （二）国外重要菌种保藏机构 思考题 1、 简答菌种保藏的基本原理和原则。 2、 如何防止菌种退化？ 3、 常用的工业微生物菌种保藏技术有哪些？ 第十三章 工业微生物菌种复壮和保藏 性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异； b）污染； c）死亡。 第一节 菌种的退化与复壮 菌种退化，主要指生产菌种的或选育过程筛选出来的较优良的菌株，由于进行移接传代或保藏之后，群体中某些生理特性和形态特征逐渐减退或完全丧失的现象。 菌种退化的才集中表现：代谢产物合成能力下降；产量低、发酵力和糖化力降低，孢子数量减少，菌落变小，生长速度减慢等。 一、菌种的退化原因 （一）基因突变 1. 基因突变导致菌种退化 （1）表型延迟现象； （2）双核或多核孢子分离； （3）非正倍体或部分双倍体分离、 纯菌种 自发突变 不纯菌种 突变个体 传代增殖 原始个体 衰退菌种 2. 质粒脱落导致菌种退化 细胞中控制产量的质粒脱落或者核内DNA和质粒复制不一致，经过多代繁殖后，某些细胞中将出现不具有这一类对产量起决定作用的质粒，这些细胞出现的比例越来越大，以致产量下降，菌种退化。 （二）连续移代 菌种移接代数越多，发生突变的概率就越高。 （三）培养和保藏条件的影响 不良的培养条件，如培养基组成、pH值、通气等和保藏条件如营养、培养基含水量，温度、氧气等，不仅会诱导低产基因型菌株的出现，而且会造成低产基因和高产基因细胞的数量比发生变化。 要采用减少传代、经常纯化、创造良好的培养条件，用单细胞移植传代以及科学的保藏方法等措施，不但可以使菌种保持优良的生产能力，而且还能使已退化的菌种得到恢复提高。 二、菌种退化的防止 1. 尽量减少传代 2. 菌种经常纯化 （1）注重菌落的纯化； （2）单细胞或单孢子的纯化； 实际工作中，要注意观察和归纳，每次移接时，要有意识地挑选这种菌落类型进行传代，就可以较长时期地保持优良的性状。 3. 创造良好的培养条件 究竟什么样的培养基能保持菌种的优良特性，应进行专门的实验研究。 4. 用单细胞移植传代 对以霉菌和放线菌，由于菌丝可能是多核的，所以尽可能用单核的孢子移接，如采用棉花团沾取孢子接种。 5. 采用有效的菌种保藏方法 （1）良好的保藏培养基； （2）良好的保藏的温度条件。 （一）菌种复壮的原理 （1）狭义的复壮：从衰退的菌种群体中把少数正常个体再找出来，重新获得具有原有典型性状的菌种。 （2）广义的复壮：有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种维护工作中不断筛选“正变”个体。 三、菌种的复壮及其方法 （二）菌种复壮的主要方法 1. 纯种分离 （1）菌落纯：是只要求达到菌落纯化的水平，通过稀释平板法、划线法、表面涂血法等常规操作法，该方法较为粗放，适用于菌退化不太严重的情况。 （2）细胞纯：采用单胞分离法，也可以二者结合，先用前一种方法获得较纯的菌种后再采用单胞分离法进一步纯化。 通过物理、化学的方法处理菌体(或孢子)，使大部分死亡(80%以上)，存活的菌多为生长健壮者，可从中选出优良菌种来。 2. 淘汰法 3. 宿主体内复壮法 对于寄生性微生物如苏云金杆菌、白僵菌、多角体病毒等，由于长期使用，其毒力会下降，导致杀虫效率降低待衰退现象。这时可以用菌种却感染菜青虫幼虫等，然后从致死的虫体上重新分离，经过几次重复感染与分离，就可以逐步恢复和提高毒力。 第二节 工业微生物菌种的保藏 工业微生物菌种保藏与其他目的的菌种保藏要求有所不同。 工业微生物菌种保藏，是要使菌种生产能力和与生产工艺相适应的优良性状保持稳定，当然做不到绝对不变，只是力求把这种衰退现象推迟减缓到最低限度。 一、菌种保藏 目的：在一定时间内使菌种不死、不变、不乱，以供研究、生产、交换之用。 基本原则：1、挑选典型菌种的优良纯种 2、尽量使用分生孢子、芽孢等休眠体 3、创造有利于休眠的保藏环境（如干燥、低温、缺营养、缺氧） 4、尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株 1、斜面保藏法 简单冷冻（低温40C冰箱），保藏3-6个月，优点是简单方便，缺点是保藏时间不长，此法细菌保存采用的较多。 2、石蜡保藏： 利用缺氧、冷却。（细菌、无孢子的丝状菌，如920产生菌）石蜡使斜面与空气隔绝，造成缺氧环境。保藏期：一年左右。（视菌种