蛋白电泳在肾脏疾病诊断中的临床应用.说课.ppt

* 血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C * * 石家庄市,-河北医科大学第三医院血液科 * * * * 电泳是个古老又新颖的技术 * * * 浆细胞病的诊断和治疗监测 某些情况下，特别是对轻链型的M蛋白，比血清免疫固定电泳更加敏感。因为游离轻链的分子量比较小（25－50KDa）更容易通过肾脏清除进入尿液中，从而在尿中被检测到。 * SDS是阴离子十二烷基硫酸钠的简写。SDS尿蛋白电泳，就是将尿液在电泳前，用过量SDS进行处理，将尿液中的蛋白质转变成SDS-蛋白络合物，蛋白质的自身形态被破坏，它们都具有相同的构造，且每个质量单位都有相同的负电荷。当此类SDS-蛋白络合物被加电泳胶片的点样处后，在电场力的作用下, SDS-蛋白络合物从负极向正极泳动。 分子量小的SDS-蛋白络合物能够较快地穿过琼脂糖凝胶的蜂窝状孔隙而继续向前泳动,但分子量大的SDS-蛋白络合物较慢穿过琼脂糖凝胶的蜂窝状孔隙，只能缓慢地向前泳动。 电泳一段时间后, 分子量最小的SDS-蛋白络合物走在最前面,其次是分子量大一点的, 如此类推, 从而达到了蛋白质,按分子量大小依次分离的目的。 * * * 特征：以急性肾炎综合征为主要临床表现的肾脏疾病：血尿，蛋白尿，水肿，高血压 临床表现： 本病主要发生于儿童，高峰年龄为2-6岁，2岁以下或40岁以上的患者仅占所有患者15%。 病理检查： 病理免疫荧光检查可见：免疫复合物沉积，主要是IgG和C3，IgA和IgM较少见 电镜检查可见上皮细胞下“驼峰状”电子致密物沉积。 尿液检查：几乎所有患者都有镜下血尿或肉眼血尿。尿中红细胞多为畸形红细胞。尿沉渣可见白细胞，小管上皮细胞，并可有红细胞管型，颗粒管型。 血常规：可由轻度贫血，白细胞计数可正常或升高，血沉加快。 免疫学检查： 动态观察C3的变化对诊断急性肾炎非常重要。疾病早期，C3下降，8周内恢复到正常水平，是急性肾炎的重要特征。 免疫球蛋白 C3补体 α -1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白 转铁蛋白 白蛋白 α-1 酸性糖蛋白 α -2 巨球蛋白 血红素结合蛋白 急性期反应蛋白 P N 临床表现：以血尿，蛋白尿，水肿和高血压为基本症状。 发病机制：主要与原发病的免疫炎症损伤有关 实验室检查： 疾病早期尿液检查可表现为程度不等的蛋白尿或血尿，可见红细胞管型，部分患者出现大量蛋白尿，定量结果大于3.5g/24h. 免疫球蛋白 C3补体 α -1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白 转铁蛋白 白蛋白 α-1 酸性糖蛋白 α -2 巨球蛋白 血红素结合蛋白 ①高蛋白尿 ②高度水肿 ③高脂血症 ④低白蛋白血症 三高一低 肾病综合征是肾小球疾病 中一种常见的临床综合征 微小病变性肾病 系膜增生性肾小球肾炎 局灶节段性肾小球硬化症 膜　性　肾　病 膜增生性肾小球肾炎 原发性 系统性红斑狼疮 糖尿病 过敏性紫癜 乙型肝炎 多发性骨髓瘤 原发性 继发性 胆固醇 三酰甘油 总蛋白 白蛋白 30g/L 尿液检查 血液学检查 白蛋白 α1、?球蛋白 α2、?球蛋白 血脂 血浆蛋白电泳 血浆蛋白 N P 总蛋白浓度降低(低于 60g/l) 电泳图谱---肾病综合征 M蛋白？ 什么类型？ 2. 血清免疫固定电泳 血清免疫固定电泳 ELP 泳道: 固定液 G 泳道： 抗 IgG 重链抗血清 A 泳道： 抗 IgA 重链抗血清 M 泳道： 抗 IgM 重链抗血清 K 泳道： 抗? 轻链抗血清 L 泳道： 抗 ?轻链抗血清 仪器： Sebia 琼脂糖凝胶电泳仪 试剂：免疫固定电泳试剂 灵敏度：31-125ug/L 正常血清免疫固定 确认IgM ?型M蛋白 血清蛋白免疫固定电泳应用举例 （1） IF 在?区 发现疑似M蛋白 轻链病 血清蛋白免疫固定电泳特殊病例 免疫固定结果显示为单独的 l 成分 1844年Henry Bence Jones 在一个骨髓瘤患者尿中发现 一种具有特殊凝溶性质的蛋白 40－60℃发生沉淀，加热煮沸时溶解，冷却后又沉淀 轻链二聚体 大多数骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白 浆细胞病的诊断和治疗监测 某些情况下，特别是对轻链型的M蛋白，比血清免疫固定电泳更加敏感 因为游离轻链的分子量比较小（25－50KDa）更容易通过肾脏清除进入尿液中，从而在尿中被检测到 90~100℃ 40~60℃ 室温 本周氏蛋白检测方法—热沉淀反应法 本周氏蛋白检测方法 ---尿液的免疫固定电泳 重链 参考泳道 复合轻链 游离轻链 * 白蛋白 转铁蛋白 免疫球蛋白 小分子蛋白 小分子蛋白 微量免疫球蛋白， 转铁蛋白，白蛋白 肾小球滤过 白蛋白 转铁蛋白 免疫球蛋白 小分子蛋白 小分子蛋白 肾小管重吸收 微量免疫球蛋白，转铁蛋