原核表达材料.pptVIP

最先学习原核表达的重要性 首先：实验室主要是核酸实验和蛋白实验，原核表达是核酸和蛋白实验的基础，涵盖了很多基本实验操作，是新生熟悉实验室基本实验流程和操作的最佳入手实验。包括PCR、接菌、转化、连接、酶切、提质粒、胶回收和纯化蛋白等许多最基本的实验。 其次：我们实验室主要是做比较基因组学和比较蛋白组学的研究，原核表达是我们实验研究的基础，我们会经常表达蛋白，所以原核表达就显得尤其重要，原核表达还是缺失的基础，后面我们会做缺失实验。 再者：原核表达出来的蛋白是很多实验的基础，可以做ELISA、疫苗、检测免疫原性等等。 原核表达流程大纲 （一）引物设计 （二）获得目的基因（0.5天） （三）构建重组表达载体(0.5天) （四）获得含重组表达质粒的表达菌种（4天） （五）诱导表达、蛋白纯化与跑胶（2天） （二）获得目的基因 1.加ddH?O溶解引物，稍微离心。 2.以新鲜菌液为模板，50ul体系PCR。 3.PCR产物跑电泳，胶回收（试剂盒），测浓度。 （三）构建重组表达载体 1.目的片段和质粒分别双酶切。 BamH1最适温度是30℃，其他酶一般为37℃。 2.胶回收酶切产物，测浓度。 3.连接酶切后目的片段和质粒，16℃过夜。 （四）获得含重组表达质粒的表达菌种 1.转化 将重组质粒导入DH5α。 （1）将 DH5α（BL21 同理）冰上融化，5ul/10