专题《基因工程》专题复习说课.pptVIP

蛋白质工程的崛起 一、蛋白质工程的崛起的缘由 基因工程产物 基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。 这些天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的,它们的结构和功能符合特定物种生存的需要,却不一定完全符合人类生产和生活的需要。 二、蛋白质工程的基本途径 预期的蛋白质功能 设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列 推测相对应的脱氧核苷酸序列（基因） 三、蛋白质工程的概念 是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 蛋白质工程的基础: 蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系 蛋白质工程的实质： 改造基因 蛋白质工程的产物： 新的蛋白质 四、蛋白质工程与基因工程的关系 蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程，是包含多学科的综合科技工程领域。 1.当前医学上，蛋白质工程药物正逐步取代第一代基因工程多肽蛋白质类替代治疗剂，则基因工程药物与蛋白质工程药物的区别是（　　） A．都与天然产物完全相同 B．都与天然产物不相同 C．基因工程药物与天然产物完全相同，蛋白 质工程药物与天然产物不相同 D．基因工程药物与天然产物不相同，蛋白质工程药物与天然产物完全相同 C * ⑤过程 a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在加热作用下，_____断裂，形成___________ b、复性（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 ⑥结果： 使目的基因的片段在短时间内大量的扩增 3.人工合成 ——根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 已知核苷酸序列的较小基因可以化学合成。 质粒 目的基因 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 1.过程 （二）、基因表达载体的构建—核心 限制酶切割位点的选择必须保证目的基因，标记基因的完整性，以便于检测和表达。 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？ 2、基因表达载体的作用 3.基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞，将含有目的基因的细胞筛选出来如：抗生素抗性基因 注：目的基因、启动子、终止子不是质粒上固有的，标记基因、复制原点是质粒上固有的。 4、单切酶法与双切酶法 单切酶法：就是用同一种限制酶切割含目的基因的DNA片段和载体，形成相同的黏性末端，可用DNA连接酶连接重组DNA。由于单切酶切割后目的基因的前后各有一个互补的黏性末端，这两个互补的黏性末端会发生碱基互补配对使目的基因前后相连，形成自身连接，自身环化。同理质粒在DNA连接酶的作用下也会出现前后相连，形成自身连接。 双切酶法：就是用两种不同的限制酶切割含目的基因的DNA片段和运载体，使它产生两个不同的黏性末端，此时目的基因、载体就不会发生自我环化。而且在DNA连接酶的作用下，载体只能与目的基因的相应末端互补连接成重组质粒。 （三）、将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 双子叶植物和裸子植物中常用方法 （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 单子叶植物常用的转化方法，成本较高 我国独创的转化方法 如：我国的转基因抗虫棉 书P16 显微注射技术 注入的是含有目的基因的表达载体 是转基因动物中采用最多、最有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法。 2、将目的基因导入动物细胞 常用受精卵或核移植后的重组细胞等 用原核细胞作为受体细胞的原因？ 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等 大肠杆菌应用最为广泛 大肠杆菌细胞最常用的转化方法： Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA溶于缓冲液中与感受态细胞混合→在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子→完成转化过程。 3、将目的基因导入微生物细胞 （四）、