综合化学实验I之色素提取和分离绪论.ppt

吸附色谱是以氧化铝、硅胶等为吸附剂，将一些物质从溶液中吸附到它的表面上；然后用溶剂洗脱或展开，利用不同物质在吸附剂和溶剂之间分布情况不同而得到分开。如柱色谱和薄层色谱。 分配色谱是利用混合物的组分在两种种互不相溶的液体中分布情况不同而得到分离。这样的分离不经过吸附程序，仅由溶剂的萃取来完成，相当于一种连续性溶剂萃取方法。 薄层色谱 薄层色谱是一种微量、快速和简单的色谱方法，用于分离、纯化和鉴定有机化合物。优点是展开时间短、分离效率高和需要样品少(几微克)，特别适用于挥发性较小，或者在较高温底下易发生变化，不宜用气相色谱分离的化合物。 薄层色谱为固—液吸附色谱。样品是在薄层板上的吸附剂(固定相)和展开剂(流动相)之间进行分离。吸附剂对各种化合物的吸附能力不同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。 吸附剂 薄层色谱中常用的吸附剂是硅胶和氧化铝。其中硅胶分为硅胶G(含有煅石膏粘合剂)、硅胶H(不含粘合剂)、硅胶HF254(含荧光物质)。氧化铝也根据含粘合剂或荧光物质分为氧化铝G、氧化铝G F254、氧化铝HF254。 1：薄层板为什么要活化？ 2：在混合物的薄层色谱中，如何定性的判定各组分在薄层上的位置。 Rf值(比迁移值) 比迁移值是表示色谱图上斑点相对位置的一个数值。 各种物质的Rf值因其结构、吸附剂种类、展开剂、温度等不同而异。当上述条件固定时，对于一个物质来说比迁移值(Rf值)是一个特性常数，可以用来鉴别不同化合物，还可用于物质的分离和定量测定。 四、实验步骤 2 色素的纯化 纯化色素，将滤液转入分液漏斗，加入5mL饱和NaCl溶液和45mL蒸馏水，轻轻震荡，放置分层。小心将下层含乙醇水溶液放掉，余下的色素提取液进一步采用离心分离。取上层有机层，加入少量无水Na2SO4除去残余水分，转入暗处保存。 制备滤纸条 画滤液细线 (3) 展开*。将点好样的硅胶板放入展开缸里，液面不能超过点样线，盖好盖子进行上行层析。待展开剂前沿上升到距硅胶板上端1.5~2 cm时，取出硅胶板置于通风橱里晾干，可看到层析板上出现若干色素带(4)样品收集,用刀片刮入试管中，加入5mL丙酮提取，低温避光保存。(5) 计算Rf值 分光光度法测定叶绿素a、叶绿素b及总量（选作） 鲜叶0.1g，加1.9ml H2O，磨成匀浆，取0.2ml，加80%丙酮4.8ml，摇匀，4000转离心3min，上清液在645，652，663测定A，计算Chl a，Chl b和Chl总量的值。 ?Ca(mg/L)=12.7A663-2.69A645 ?Cb(mg/L)=22.9A645-4.68 A663 ?CT (mg/L)= Ca+ Cb或A652×1000/34.5 实验中的注意事项 选取新鲜的叶片 研磨时加溶剂 研磨时加MgCO3 研磨快速、充分 滤液注意封闭 下页 退出 上页 * 下页 退出 上页 退出 * 上页 退出 植物中叶绿体色素的 提取和分离 综合化学实验I 返回 实验目的 实验原理 试剂及仪器 实验步骤 注意事项 返回 一、实验目的 1.学习从植物中提取色素的方法。 2.学习薄层板的制备以及薄层色谱(层析)和纸色谱(层析)的原理及其操作方法。 返回 二、实验原理 返回 绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色素。 植物叶绿体色素可通过丙酮、乙醇、乙醚、丙酮-乙醚、甲醇-石油醚等有机溶剂提取。 通过纸色谱(层析)和薄层色谱(层析)对菠菜叶中的上述几种色素进行分离。 叶绿素a(R=CH3) 叶绿素b(R=CHO) β-胡萝卜素(R=H) 叶黄素(R=OH) 返回 叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素极性次序为何？ 叶绿体中的色素 类胡萝卜素 叶绿素 胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b (占1/4) (占3/4) 色谱法分为吸附色谱和分配色谱两类 返回 返回 展开剂 薄层色谱的展开剂主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性来考虑。溶剂极性越大，对化合物的洗脱力也越大。薄层色谱的展开要在密闭的容器内进行。 返回 返回 提问 薄层色谱的展开 dA dS 溶质的最高浓度中心至原点中心的距离 溶剂前沿至原点中心的距离 返回 三、试剂及仪器 返回 硅胶G 乙醇 石油醚 丙酮 乙醚 NaCl KOH 无水硫酸钠 新鲜菠菜 试剂： 仪器： 载玻片； 离心机； 层析缸； 研钵 滤纸等 四、实验步骤 返回 1. 菠菜色素的提取： 把新鲜菠菜洗净晾干或用滤纸吸干，称取5g菠菜叶，剪碎后放入研钵，加入0.1g 碳酸镁，再加入10mL乙醇