分离工程复习资料 整理版.docx

 PAGE \* MERGEFORMAT 13 生物分离过程的特点： ①生物物质的活性，遇高温，pH变化，化学药物时不稳定，料液中常有讲解目标产物的物质（酶），设计合理的分离过程和操作条件，快速分离纯化得到高活性的目标产物。 ②与人类生命相关的产物，应除去对人类有害的物质，并防止其从外界混入。 ③存在于目标产物相似的分子或异构体，采用多种分离方法或多个分离步骤。 整个过程的总回收率YT=Y1+Y2+Yi 回收率低，成本大 提高回收率：提高每一步的回收率，减少步骤 ④原料液中目标产物浓度低，需要进行高浓度浓缩，成本高。 生物分离技术和原理 物理性质：①力学性质（密度、尺寸、形状） ②热力学性质（溶解度、挥发度、表面活性、相间分配平衡） ③传质性质（粘度、扩散系数） ④电磁性质（电荷特性、电荷分布、等电点、磁性） 化学性质：化学平衡、反应速率、激光激发作用 生物学性质：利用分子识别作用、利用酶反应的立体选择性 3、对于特定的分离方法或分离设备，评价指标包括 分离容量capacity：单位体积的分离设备处理料液或目标产物的体积或质量。 分离速度speed：单批次分离所需的时间，或连续分离过程的进料速度。 分辨率resolution：目标产品的纯化效果或杂志的去除能力。 4、重力沉降 球形固体颗粒的匀速沉降速度为Vg=dp2（ρS -ρL）g / 18μL 5、如何提高重力沉降？ ①在中性盐的作用下，可使菌体表面双电层排斥电位降低，利于菌体之间产生凝聚。 ②向菌体的料液中加入高分子絮凝剂，可使菌体之间产生架桥作用而形成较大的凝聚颗粒。 凝聚或絮凝有利于重力沉降，还可以提高过滤速度和质量。培养液中含有蛋白质时，可使部分蛋白质凝聚而同时过滤除去。 6、单位质量的物质所受到的离心力为Fc=rω2 7、差速离心differential centrifugation 以菌体细胞的收集或除去为目的的固液离心分离是分级离心操作的一种特殊情况，即为以及分级分离。菌体和细胞一般在500-5000g的离心力下就可以完全沉降。 8、区带离心zonal centrifugation：差速区带离心、平衡区带离心 需要事先在离心管中用某种低分子溶质调配好密度梯度，在密度梯度上加待处理的料液进行离心分离操作。用于蛋白质、核算等生物大分子，处理量小，仅限于实验室水平。 区别：差速（密度梯度中的最大密度小于待分离的目标产物的密度）平衡（密度梯度比差速的密度梯度高） 9、过滤filtration：利用薄片形多孔性介质节流固液悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法。 10、过滤速度：透过速度dQ/dt=A△p/μL（Rm+Rc） A过滤面积 △p操作压力 Q滤液体积 μL滤液粘度 Rm、Rc介质和滤饼的阻力 滤饼阻力是影响过滤速度的主要因素，如何提高过滤速度？ ①对滤液进行絮凝或凝聚等预处理，降低滤饼的阻力。 ②在料液中加入助滤剂，但以菌体细胞为收集目的时，会给之后的操作带来麻烦。 11、细胞破碎主要采用机械破碎法mechanical disruption和化学破碎法chemical disruption（又称化学渗透chemical permeation），或二者结合。 12、高压匀浆，又称高压剪切破碎，其机理：细胞悬浮液在高压作用下从阀座与阀左键的环隙高速喷出后撞击到碰撞环上，细胞在受到高速撞击作用后，急剧释放在低压环境，从而在撞击力和剪切力等综合作用下破碎。 超声波破碎的机理：在超声波的作用下液体发生空化作用，空穴的形成、增大和闭合产生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎。 化学和生物化学渗透 ①酸碱处理：利用酸碱调节pH值，提高目标产物溶解度。 ②化学试剂处理：用表面活性剂或有机溶剂处理细胞，可增大细胞壁通透性。变性剂能破坏氢键作用，降低胞内产物之间的相互作用，使之容易释放。 ③酶溶：利用溶解细胞壁的酶处理菌体细胞，使细胞壁受到部分或完全破坏后，再利用渗透压冲击等方法破坏细胞膜，进一步增大胞内产物的通透性。 目标产物的选择性释放原则： ①仅破坏或破碎存在目标产物的位置周围： 当目标产物存在于细胞膜附近时，可采用比较温和的方式。 当目标产物存在于细胞质内时，需采用强烈的机械破碎法。 ②选择性溶解目标产物：当目标产物处于与细胞膜或细胞壁结合的状态时，调整溶液pH值、离子强度或添加与目标产物具有亲和性的试剂，使目标产物容易溶解释放，溶液性质应使其他杂质不易溶出。机械法和化学法并用可使操作条件更温和，在相同的目标产物释放率的情况下，降低细胞的破碎程度。 沉淀precipitation是物理环境的变化引起溶质的溶解度降低、生成固体凝聚物的现象。 蛋白质为什