排阻色谱法.ppt

（二）排阻色谱不适用范围 1、分子直径比最大孔隙直径大的分子全部被排阻在凝胶颗粒以外，叫做全排除，两种或两种以上的这样的分子不能达到分离效果。 2、直径比最小孔隙直径小的分子能全部进入凝胶颗粒内部，这样的两种或两种以上的分子也不能达到分离效果。 两种排阻色谱类型比较 凝胶渗透色谱（GPC） 凝胶过滤色谱（GFC） 流动相 采用水溶液或缓冲液作为流动相 采用有机溶剂作为流动相 常用分析物质 分析高聚物的摩尔质量，如：聚乙烯、聚氯乙烯等 多肽、蛋白质、核酸、多糖等 常用凝胶 交联聚苯乙烯凝胶 葡萄糖系列 优点 操作简便，进样量小，重现性好，自动化程度高 条件温和，产品回收率近100%，易实施循环操作，提高产品纯度，分析速度快，精度高，分离机理简单，操作参数少。 缺点 质脆易碎，柱子装填不紧，柱效低。 选择性低，料液处理量小，洗脱后产品被稀释 流动相的选择 必须能溶解样品，与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶。 溶剂的粘度要小，因为高粘度溶剂限制分子扩散作用。 常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、氯仿、二甲基酸胺和水等。 三、固定相与流动相 固定相——凝胶：一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体，含有大量液体(一般是水)，柔软而富于弹性。 分类： 1、按机械强度可分为软性、半刚性和刚性凝胶三类。 2、按化学性质分为有机凝胶（均匀凝胶、半均匀凝胶、非均匀凝胶）；无机凝胶（非