动物细胞培养常用试剂介绍重点.ppt

动物细胞培养常用试剂介绍 Hank’s液 D-Hank`s液 PBS EDTA 胰蛋白酶 青霉素、链霉素 Hank`s液与D-Hank`s液 Hank`s液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hank`s液则是无钙镁离子的Hank`s液（也有资料认为除了不含钙镁离子之外也不含葡萄糖）。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在这种BSS中可生存几个小时。 Hank`s液配方 Hank`s液（原液）?????? 原液甲： NaCl????????????????????????????? 160g???????????????????????? KCl????????????????????????????????? 8g???????????????????????? MgSO4·7H2O??????????????? 2g???????????????????????? MgCl2·6H2O????????????????? 2g????? 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。???????????????????????? CaCl2?? 2.8g溶于100ml双蒸水????? 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。?????? 原液乙：?? Na2HPO4·12H2O??????????????? 3.04g????????????????????????? KH2PO4??????????????????????????????? 1.2g????????????????????????? 葡萄糖??????????????????????????????????? 20g????????????????????????? 加入800ml双蒸水，溶解。?????????????????????????? 0.4%酚红溶液????????????????????? 100ml??????? 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。??????? 使用时甲，乙原液按下列比例配成 Hanks 液 ??? 使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO3调整pH值。 D-Hank`s液配方 D-Hanks液????????????? NaCl???????????????????????????????? 4.5g???????????? KCl?????????????????????????????????? 0.2g???????????? NaHCO3???????????????????????? 0.175g???????????????? Na2HPO4·12H2O????????? 0.076g???????????? KH2PO4????????????????????????? 0.03g???????????? 葡萄糖???????????????????????????? 0.5g???????????? 0.4%酚红??????????????????????? 2.5ml???????? 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中，最后加双蒸水定容至500ml，以5.6%NaHCO3调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。 酚红在低pH值时呈现黄色,在pH6.6至8.0间会呈现橙色，在高pH值时呈现红色。 酚红只是起指示酸碱度的作用，有酚红较方便但没有也无妨。有人主张最好不用酚红，可能对细胞生长不利，有时也会影响一些检测结果。 此外酚红有雌激素样作用，所以如果做相关的实验最好不加。 对于Hank`s与D-hank`s液的配制，不同的文献有不同的配方 我们可以看到，两者最主要的区别就是D-hank`s液中没有钙镁离子。 Hank`s液与D-Hank`s液用途上的比较 Hank`s液是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗涤组织、细胞等。细胞在Hank`s液中可以在一段时间内维持一定的活力。另外Hank`s液还可以用于终止EDTA的作用。 配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基础液都是D-hanks 液，而不能使用Hank`s液。 这是由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活性，也会阻碍EDTA的作用。 PBS 磷酸盐缓冲液 ??? 磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽： ?????????? NaH2PO4：? pKa1＝2.12，? pKa2＝7