第八章工业微生物代谢控制育种总结.ppt

2、耐前体结构类似物突变株的选育 如：硝吡咯菌素产生菌耐5-氟色氨酸的前体高产菌株的选育。 3、耐前体的有关代谢物突变株的筛选 如：抗缬氨酸的的麦迪霉素高产菌株的选育。 六、细胞膜透性突变株的选育 1、营养缺陷型突变株的选育可改变细胞膜透性； （1）生物素缺陷型的突变株； （2）油酸缺陷型的突变株； （3）甘油缺陷型的突变株。 这三种突变株的使用必须代谢控制发酵相结合，才能达到高产的目的。 2、温敏突变株的选育； 如用温度敏感突变株发酵生产谷氨酸，控制发酵温度有30℃提高到40℃，可在富含生物素的天然培养基中产谷氨酸的含量达到20 g/L。 控制温敏突变株的发酵关键是在生长期转换温度，保证完成从产物非积累型细胞向产物积累型细胞的转变。 3、溶菌酶敏感突变株的选育 溶菌酶能够抑制细胞壁的合成，有利于胞内产物的分泌。如果在发酵中使用溶菌酶抑制细胞壁的合成，所需的浓度较高。选育溶菌酶敏感的突变株，可以降低溶菌酶的用量。 第八章 思考题 1、 什么是初级代谢和次级代谢？ 2、 初级代谢调节最有效的手段是什么？ 3、 酶合成调节与酶活性调节的区别。 4、 反馈阻遏和反馈抑制的区别。 5、 什么是诱导和阻遏？ 6、 什么是末端产物阻遏和分解代谢物阻遏？ 7、 反馈抑制有哪6种基本类型？ 8、 什么是代谢调节控制育种？其常用方法有哪些？ 9、 组成型突变株和抗分解调节突变株选育的基本方法有哪些？ 10、 抗反馈调节突变株选育有哪三种常用方法？ 11、 真正的回复突变和基因抑制突变有何不同？ 12、 代谢控制育种的常用手段有哪些？ 五、磷酸盐的调节 过量则促进菌体生长，但是抑制抗生素合成； 亚适量：控制在适合菌体生长的浓度以下。 调节机制：直接作用和间接效应。 六、细胞膜透性的调节 胞内产物分泌到胞外；胞外营养物质进入胞内。 例如：青霉素发酵中，产生菌细胞膜输入硫化物能力的高低是影响青霉素发酵单位高低的一个因素。 第四节 代谢调节控制育种 代谢控制育种：通过定向选育某种特定的突变型，改变代谢通路、降低支路代谢终产物的产生或切断支路代谢途径及提高细胞膜的透性，以达到大量积累有益产物的目的。 一、组成型突变株的选育 代谢控制发酵：通过培养条件来解除反馈调节而使生物合成的途径朝着需要的方向进行。 代谢控制育种：通过定向选育某种特定的突变型，以达到大量大量积累有益产物的目的。 操纵基因或调节基因突变引起酶合成诱导机制失灵，菌株不经诱导也能合成酶、或不受终产物阻遏的调节突变型。 乳糖操纵子 筛选方法及实例： 1、限量诱导物恒化培养 将菌种诱变后移接到低浓度诱导物的衡化器中连续培养。 如 ：大肠杆菌在恒化器中培养，限量补充乳糖，选育出不需要乳糖就可以大量产生β-半乳糖苷酶的组成性突变株。 2、循环培养 在含诱导物和不含诱导物的培养基上交替连续循环培养。 例如，先用含葡萄糖的培养基培养诱变过的大肠杆菌，稀然后将此培养物转移到含乳糖的培养基中，重复这个过程，最终组成性的突变株就会占优势而被选出来。 3、鉴别性培养基的利用 以甘油为唯一碳源，菌落上喷O-硝基苯酚-β-D-半乳糖苷（ONPG），通过显示来判断半乳糖苷组成型突变株。 4、筛选 用诱导能力低，但能作为良好碳源的诱导物的培养基上培养，突变体良好生长，野生型不能生长。如利用苯-β-半乳糖苷酶组成型突变株。 二、抗分解调节突变株的选育 抗分解调节突变就是指抗分解阻遏和抗分解抑制的突变。 其实就是筛选合成酶的产生不受碳、氮、磷的代谢阻遏或抑制的突变株，使抗生素提前到菌体生长期开始合成，从而延长了产抗期而提高产量。 （一）解除碳源调节突变株的选育 1、循环培养法：快速利用和慢速利用的碳源交替培养 例如，先用含快速利用（如葡萄糖）的培养基培养诱变过的大肠杆菌，稀释后将此培养物转移到慢速利用（如蔗糖）的培养基中，重复这个过程，最终抗分解调节的突变株就会占优势而被选出来。 2、鉴别性培养基：菌落上喷O-硝基苯酚-β-D-半乳糖苷（ONPG），显色筛选半乳糖苷酶解除碳源调节的突变株。 3、特殊氮源：用葡萄糖为碳源，受阻遏酶的底物为惟一氮源配制成培养基。 4、葡萄糖结构类似物 如2-脱氧葡萄糖（2-dG）和3-O-甲基葡萄糖（3-mG），不被微生物利用，不被代谢，但可以阻遏诱导酶的合成。 筛选方法：低浓度葡萄糖类似物及一种生长碳源。 抗性突变株的性质：抗分解阻遏突变型。 （二）解除氮源分解调节突变株