基因组dna的提取鉴定.ppt.pptVIP

Please be quiet, 上课了！！ 基因组DNA的提取鉴定 一、实验目的 学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。 二、实验原理 选 材 要提取动物组织DNA，一般选择细胞膜较脆弱、容易破碎，结缔组织含量少的动物脏器，如胸腺、肝脏、脾脏、胰脏、精子等。 研磨：将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，加入少量石英砂研磨或匀浆，破碎细胞。这种方法温和，适合实验室使用。 组织捣碎器：较剧烈的破碎细胞的方法，为了防止发热和升温过高，通常是转10秒—20秒，停10秒—20秒，可反复多次。 压榨法：在1000×105Pa—2000×105Pa 的高压下使几十毫升的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。温和的、彻底破碎细胞的方法，但仪器费用较高。(少量细胞可用French press,大量可用Manto-gaulin匀浆器)。 反复冻融法：将待破碎的细胞冷至－15℃到－20℃，然后放于室温(或40℃)迅速融化，由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。 超声波处理法：借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。使用时注意降温，防止过热。 冷热交替法：在90℃左右维持数分钟，立即放入冰浴中使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以被破碎。 组织捣碎匀浆机 超声探头 细胞破碎方法—化学方法 有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯等脂溶性溶剂或