微生物实验指导汇编.doc

实验微生物培养基的配制和菌 培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基(1)适当组分和比例的营(2)适宜的pH值(3)合适的渗透压(4)保持无菌状态。所以培养基是培养一、目的耍求 1．了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 2．了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸 3．熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。、 (一) 培养基的种类 根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定 半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。 从培养基的物理状态来分： 液体培养基：不加凝固剂。 固体培养基：在液体培养基中加2％左右的凝固剂。 半固体培养基：在液体0.2％一0.5％凝固剂。 微生物最常用的凝固剂为琼脂(其次为明胶)，又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物(主要是石花菜)提取而制成的。96℃以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42以下，又凝固为 表3-1 琼脂与明胶特性比较 比较项目 琼 脂 明 胶 比较项目 琼 脂 明 胶 熔点(℃) 凝固点(℃) 酸碱度 灰 分(％) 氧化钙(％) 氯化镁(％) 氮(％) 96 40 微酸 16.0 1.15 O.77 O.40 25 20 酸性 14.0—15.0 0.0 0.0 18.3 微生物可利用性 耐热性 来 源 化学本质 常用浓度（％) 绝大多数微生物不能水解利用 强 植物 多糖 1.5—2 部分微生物能水解利用 弱 动物 蛋白质 5一12 （二）实验材料 1．药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂马铃薯，蔗糖可溶性淀粉、K2HPO、 KN03，MgS04·7H20、FeSO4·7H20、等。 2．高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌。 3．其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、三、实验 1．培养基的配制方法和步骤 (1)称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 (2)溶化在搪瓷杯中加入所需水量(根据实验需要加入蒸馏水或自来水)，用玻棒 (3)调pH值(调pH也可以在加琼脂后再调)，用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH (4)加琼脂熔化，在琼脂熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或 (5)分装：在漏斗架上分装。根据不同的需要进行分装，一般制斜面的装量为管高的 特别注意不要使培养基粘污在管(瓶)口上以免浸湿棉塞，引起污染。 (6)包扎成捆、挂上标签。培养基分装好后，塞上棉塞，用防水纸 (7)灭菌备用。灭菌后如需制成斜面的，应在下磅后取出，摆成斜面，(见图一1)。37℃恒温培养箱中培养24小时，如确无菌生长，方可使用。 ．三种培养基的配方及配制 1）.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(用于分离和培养细菌，是一种天然培养基)。 配方： 牛肉膏 3克 蛋白胨 5克 氯化钠 3克 琼脂 20克 自来水 1000毫升 pH 7．2～7．4 灭菌 15磅／英寸，30分钟。 本实验将原配方配成各种浓缩液。各种浓度如下：30％牛肉膏、50％蛋白胨，30％氯化200毫升培养基为例： 吸取30％牛肉膏2毫升，50％蛋白胨2毫升，30％氯化钠2毫升，加入有刻度的搪瓷烧杯200毫升。用玻捧搅匀，在电炉上稍加热，调pH至7.4，加琼脂4克，(见图3—2)。12支，作斜面培养基。用铝壳试管帽的10毫升，约试管高度的二分之一以上，用作分离时倒平板用。 分装完毕，以12支为一捆，用防水纸包扎成捆，(图3—3)挂上标签，灭菌备用。 （2）．马铃薯(或豆芽汁)蔗糖(或葡萄糖)琼脂培养基。(用于分离和培养真菌之用，是一)。 配方：去皮马铃薯(或鲜豆芽)200克 蔗糖(或葡萄糖) 20克 自来水 1000毫升 琼脂 20克 pH 自然 灭菌：(含蔗糖)15磅／英寸230分钟。 (含葡萄糖)10磅／英寸2