苏教版生物选修3第一节《基因工程》分解.pptVIP

1.1基因工程概述 主要内容： （1）基因工程的概念 （2）基因操作的工具 （3）基因操作的基本步 骤 １. 基因工程的概念 在生物体外，通过人工“剪切” 和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞，并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。 基因工程名称 DNA重组技术 操作环境 生物体外（人工） 操作对象 基因 操作水平 DNA分子/基因水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 （基因的分离转移、复制表达） 结果 人类需要的基因产物（按照人们的意愿，定向改造生物的遗传性状），一旦成功便可遗传。 ㈠　基因操作的工具 　　进行基因操作最少需要以下三种工具： １、基因的剪刀──限制性内切酶（限制酶） 　　一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的位点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有500多种。 1、限制性内切酶作用过程 限制性核酸内切酶 一种限制性内切酶只能识别一种特定的核苷酸序列 酶分布在细菌中特点特异性 切割位点 实质；2个磷酸二酯键的断裂 氢键会自然断裂 　　DNA被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性末端”（单链的片段）。被同一种限制酶切断的几个DNA具有相同的黏性末端，能够通过互补进行配对。 磷酸二酯键 切割位点 ２、基因的针线──DNA连接酶 　　连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 重播 ２、基因的针线──DNA连接酶 　　连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 实质：（氢键容易结合）催化形成磷酸二酯键 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ 不是一回事 相同点：都形成磷酸二酯键 不同点： 1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键； 而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2） DNA聚合酶需要以一条DNA链为模板；而DNA连接酶不需要模板。 3、基因的运输工具——运载体 　要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将目的基因送入细胞的工具就是运载体。 　　运载体必须同时满足三个要求：①含有复制原点且能保证在受体细胞中进行独立复制的复制区；②独特的标记基因；③目的基因插入位点。 常用的载体有质粒、噬菌体、动植物病毒等；最早用的载体是一种环状DNA——质粒。 目的基因插入位点 基因操作的工具 一.“分子手术刀:限制性核酸内切酶 来源:主要来自原核生物 作用:将外来的DNA切断 结果:产生黏性末端或 平末端 二.“分子缝合针”: DNA连接酶 分类:E·coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶 作用:把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来 三.“分子运输车”:基因进入受体细胞的载体 种类:质粒、动植物病毒等 条件:自我复制、限制酶切点、标记基因、 安全的、大小应适合 目前被较广泛提取使用的目的基因有： 苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 基因操作的基本步骤 (一）提取目的基因 将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 提取目的基因的方法 ⑴直接分离基因(从基因文库中获取）——鸟枪法 　　将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。 ⑵人工合成 有两种方法：　　　 ①直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 DNA合成仪 （3）利用PCR技术扩增目的基因 ②逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 (二)构建基因表达载体 4.过程: (三)将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达