脑立体定位技术切片技术-2015-1精讲.pptVIP

Interaural:耳间的 Bregma：冠矢点,前囟点 * * Techniques in Neurobiology State Key Lab of Medical Neurobiology 脑立体定位和切片技术 许玉霞 Tel:Email: xuyuxia@fudan.edu.cn 脑立体定位技术 脑立体定位技术的简单流程 动物脑立体定位：利用颅骨的标志/参考点，确定皮层下某些神经结构的位置，利用脑立体定位仪对脑进行定向的刺激、破坏、药物注射、引导电位等研究的技术。 主要用途：对神经结构进行定向的： 注射（给药） 埋管（慢性给药，透析） 损毁 记录（电生理） 前囟（Bregma）：位于冠状缝和矢状缝的交界处 人字缝尖（lambda）：位于后囟人字缝与矢状缝的交汇点 Bregma, 前囟 动物脑立体定位：利用颅骨的标志/参考点，确定皮层下某些神经结构的位置，利用脑立体定位仪对脑进行定向的刺激、破坏、药物注射、引导电位等研究的技术。 主要用途：对神经结构进行定向的 注射（给药） 埋管（慢性给药，透析） 损毁 记录（电生理） Kopf 900 Stereotaxic Kopf 1404 Frame Assembly 立体定位仪： Stereotaxic Drill Unit Adjustable Wire Knife Kopf 5000 Microinjection Unit 立体定位仪： 游标卡尺原理 根据游标上的分度格数，常把游标卡尺分为10分度、20分度、50分度。 尺身上的最小分度是1毫米，游标尺上有10个小的等分刻度，总长9毫米，每一分度为0.9毫米，比主尺上的最小分度相差0.1毫米。尺身和游标的零刻度线对齐，它们的第一条刻度线相差0.1毫米。 立体定位仪中坐标的读取 主尺 游标尺 游标卡尺按下列规则读数： （1）以游标零刻线位置为准，在主尺上读取整毫米数。 （2）看游标上哪条刻线与主尺上的某一刻线（不用管是第几 条刻线）对齐，由游标上读出毫米以下的小数。 （3）总的读数为毫米整数加上毫米小数。 研究实例 MFB: (1) AP: -4.4 mm, ML: 1.2 mm, V: -7.8 mm; (2)AP: -4.0 mm, ML: 0.8 mm, V: -8.0 mm 内侧前脑束（MFB）:从基底嗅区、旁杏仁核区和隔核出发投射至下丘脑侧部的一组复杂纤维。MFB的DA能神经纤维相对集中，相对小剂量的6-OHDA注入MFB能造成更多的DA能神经元死亡。 [器材和药品] 立体定位仪、10％水合氯醛麻醉剂、1ml注射器、手术刀、组织剪、止血钳、牙科钻或骨钻、金属定位针、脱脂棉花、3%双氧水（H2O2）、缝针与缝线、75%酒精 [实验动物] 雄性SD大鼠 ，体重约 200-300 g 实 验 准 备 [操作步骤] 1. 立体定位仪的一般校验 2. 动物麻醉：动物称重后，水合氯醛溶液按3.6ml/kg作腹腔注射麻醉。 3.?头部固定： （1）插入耳棒: 先将一侧耳棒轻轻插入外耳道，碰到骨性外耳道底后固定耳棒，继之同样固定另一耳棒。检查大鼠头部固定是否稳定，松斜，两侧耳棒刻度是否对称，轻移耳棒使两侧刻度一致，头位完全居中，再次固定耳棒。 三个标准检测是否固定成功：鼻对正中，头部不动，提尾不掉 （2）固定上颌：将大鼠的上门牙塞进上齿固定板的槽内，旋紧螺丝。从各方向推压动物头部，均不应出现移动。 通过定位针的测量调节前后囟在同一矢状线上，并使前后囟在同一水平线上。 4. 开颅：剪去头部的毛，用碘酒与酒精棉球消毒头部皮肤，沿矢状缝作切口，剥离筋膜及肌肉，推开骨膜，暴露骨缝，并用3%双氧水洗净，止血。 5. 脑内核团定位: (1) 根据脑图谱，确定所要研究神经核团的立体位置 （注意：所研究的脑核团距脑表面的距离和颅骨表面的距离）。 (2) 用定位针参照中线和前后囟在颅骨上标记进针的部位后，在指定位置钻孔。 6. 定位标记及组织学鉴定： (1) 定位标记：根据定位坐标，插入微量注射针，注入染料。 (2) 组织学鉴定： 动物处死后，大鼠用左心室-主动脉插 管，先后用生理盐水和4%多聚甲醛溶液灌流固定，取脑作冰 冻连续切片，观察确定注射位置是否准确 纹状体：前囟前1 mm, 旁开2.5 mm, 深 3.5 mm 1.00