干旱胁迫下咖啡酸对黄瓜基因组DNA甲基化的影响和一个甲基化差异基因的功能分析.pdfVIP

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2017-05-06 发布于安徽
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干旱胁迫下咖啡酸对黄瓜基因组DNA甲基化的影响和一个甲基化差异基因的功能分析.pdf

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目录中文摘要………………………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………………………3 1引言…………………………………………………………………………………………5 1．1研究干旱胁迫的意义……………………………………………………………………。5 1．2干旱胁迫对植物的影响…………………………………………………………………一5 1．2．1干旱胁迫对植物生长的影响…………………………………………………………．．5 1．2．2干旱胁迫对植物抗氧化酶的影响……………………………………………………．．6 1．2．3干旱胁迫对植物体内脯氨酸和可溶性糖含量的影响…………………………………7 1．3植物DNA甲基化的研究进展…………………………………………………………一8 1．3．1 DNA甲基化的形成机制及生物学功能………………………………………………．8 1．3．2 DNA甲基化常用的检测方法…………………………………………………………．9 1．3．3干旱胁迫对DNA甲基化的影响……………………………………………………．．10 1．4外源咖啡酸(CA)预处理缓解干旱胁迫的研究进展………………………………．10 1．5外源H202对植物逆境胁迫的缓解作用及黄瓜转基因的研究现状…………………．10 1．5．1 H202对植物逆境胁迫的缓解作用……………………………………………………10 1．5．2黄瓜转基因的研究现状………………………………………………………………11 1．5．3黄瓜遗传转化技术的研究……………………………………………………………12 1．6本研究的目的意义………………………………………………………………………12 2材料与方法………………………………………………………………………………．．14 2．1实验材料…………………………………………………………………………………14 2．1．1植物材料………………………………………………………………………………．14 2．1．2菌株与质粒……………………………………………………………………………．14 2．1．3酶与各种生化试剂……………………………………………………………………．14 2．2方法………………………………………………………………………………………．．14 2．2．1外源CA对黄瓜幼苗干旱胁迫的缓解作用…………………………………………．15 2．2．1．1咖啡酸缓解黄瓜干旱胁迫时的最适浓度确定……………………………………．．15 2．2．1．2黄瓜幼苗生长指标的测定…………………………………………………………．．15 万方数据 2．2．1．5 02’’含量的测定………………………………………………………………………15 2．2．1．6黄瓜叶片抗氧化酶的活性测定……………………………………………………．16 2．2．1．8黄瓜叶片脯氨酸可溶性糖含量的测定……………………………………………．．19 2．2．2外源CA对干旱胁迫下黄瓜幼苗DNA甲基化的影响……………………………．．19 2．2．2．1黄瓜基因组DNA的提取、纯化及酶切……………………………………………19 2．2．3黄瓜甲基化差异基因的表达分析……………………………………………………．26 2．2．4黄瓜甲基化差异基因反义基因的遗传转化…………………………………………27 2．2．4．1黄瓜甲基化差异基因反义基因的扩增、克隆及序列测定………………………．．27 2．2．4．2反义表达载体的构建………………………………………………………………．28 2．2．4．4转基因植株的PCR筛选……………………………………………………………29 2．2．4．5转基因阳性植株的生理生化指标测定……………………………………………．30 1 3结果与分析…………………………………………………………………………………3 1 3．1外源CA预处理对干旱胁迫下黄瓜幼苗的缓解作用…………………………………3