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微免实验整理 第  PAGE 12 页 共  NUMPAGES 12 页 整理by陆 （一） 实验一 ■ 大吞噬现象、小吞噬现象 吞噬功能的测定计数方法： ①吞噬百分率:计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数,即为吞噬百分率。 ②吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计数被吞噬的细菌总数，求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。 ·大吞噬现象要认识“巨噬细胞” ·小吞噬现象主要认识“中性粒细胞”（马蹄状形） （二）实验二 ■ 淋巴细胞转化试验（原理、分型、意义） 1、原理：T淋巴细胞可以在分裂剂的刺激下，向母细胞转化。促分裂剂能选择性地激发T淋巴细胞合成DNA与细胞分裂。转化百分率正常值为70%左右 2、分裂相：即染色体型 3、母细胞：较小淋巴细胞大4-5倍；核质疏松呈网状结构，有1-3个核仁；核周透明区；胞浆嗜碱性，有空泡 4、过渡型：较小淋巴细胞略大；核??略疏松；着色较淡 5、小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少 6、意义：体外淋巴细胞转化反应，可为测定机体细胞免疫状态的指标之一。 ■ E玫瑰花环实验 1、原理：T细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环，由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞 2、判定结果：凡是淋巴细胞周围围绕4个以上绵羊红细胞者为阳性 ■ 血清学反应 1、基础：抗原决定簇——抗体的互补决定区 2、特点：特异性、可逆性、 比例性、阶段性 3、抗原抗体反应因素：电解质、温度、酸碱度 4、抗原或抗体的检测方法：凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术 I 凝集反应：（直接、间接） 概念：抗原 + 抗体 = 凝集团块 直接凝集：颗粒性抗原 + 抗体 = 凝集团块（ 玻片法、试管法） ⑴直接凝集反应——玻片凝集反应 定性；用已知抗体检测颗粒性抗原；细菌的诊断和分型，红细胞ABO鉴定 出现白色凝集块，属于阳性反应 ⑵直接凝集反应——试管凝集反应（半定量，诊断伤寒副伤寒） 间接凝集：可溶性抗原包被于载体 + 抗体 = 凝集团块 反向间接凝集：抗体包被于载体 + 抗原 = 凝集团块 协同凝集：抗体结合金葡菌SPA + 抗原 = 凝集团块 II 沉淀反应：（单项、双向） 概念：可溶性抗原 + 抗体 = 沉淀物 ① 单向琼脂扩散 单向琼脂扩散试验是一种定量试验。将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。 主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量 ② 双向琼脂扩散 可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分（抗原、抗体同时扩散（自由、定向） ③ 对流免疫电泳 在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。 ④火箭电泳：抗原定量试验（抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向） 将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。敏感度与单扩相仿，但需时较短。 III 直接凝集反应—玻片凝集 （三）实验三 ■ 补体结合实验 ■ 中和反应实验：（病毒中和实验、毒素中和实验）略 ■免疫标记技术： 1、概念：将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。 2、原理：免疫标记技术是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称FITC）与特异性抗体（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光显微镜加以观察。 3、常用的标记物有： 酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。 ■ E L I S A（酶联免疫吸附试验） 1、原理：把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。 2、方法：主要有间接法（用于测抗体）和双抗体夹心法（用于测抗原）。 ■ 革兰染色 1、意义：对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。 2、原理：与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。 阴性—红色 阳性—蓝色 ■ 细菌学总论 ①细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形体微小，一般以微米（μm）作为测量单位。 ②细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。 ③不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约1μm，杆菌长2～5μm，