离心技术2015.9预案.ppt

细胞培养 和 离心技术;细胞结构成分分离的离心技术;一.离心技术原理 （Centrifuge);;3个因素： 沉降系数 相对离心力 离心时间;1.沉降系数（S）：重要指标;决定沉降速度的因素： 与颗粒大小有关；与颗粒密度有关； 与溶液介质密度和粘度有关。;离心分离时，作用在悬浮颗粒上的力常用RCF数值表示，即同一颗粒在离心时的离心力同地球重力相比较后得到的值。 RCF(g)=离心力/重力＝mw2x/mg=w2x/g =1.12r(RPM/1000)2 r: 旋转中心轴至转头内离心管某一部位的半径 RPM（rounds per minute，转速): 转头每分钟旋 转的次数 ;3.离心时间; 性能指标： (1) 离心力：能达到的RCF； (2) 离心效力：K因子：k值越小，离心时间越 短，转头的效力越高。 ;RCF1×t1= RCF2×t2;颗粒的沉降系数 加在颗粒上的相对离心力 离心时间;二.离心设备：离心机及离心管;离心机分类;OptimaTM L-XP（Beckman Coulter) 制备型超速离心机;性能指标： (1) 离心力：能达到的RCF； (2) 离心效力：K因子：k值越小，离心时间越 短，转头的效力越高。 ;转头类别：转头与旋转轴的角度;短; Beckman 公司转头的标记 SW: 水平转头,如SW50.1； V： 垂直转头,如V Ti80； NVT: 近垂直转头； Type: 固定角转头,如Type80Ti JA: 使用在J系列的固定角转头，如JA.2 JS: 使用在J系列的水平转头，如JS.13.1 数字：最高安全转速（×1000）； Ti: 钛合金，未标记为铝合金 ; 金属疲劳 转子内部的应力改变导致裂纹 注意：安全系数2；钛合金；转头寿命 超速 测速盘（超速花盘） 化学腐蚀 离心管破裂、样品渗漏 转头不平衡 离心管平衡误差0.01g；离心管放置不对称；水平转 头吊桶盖安装不当；转头不加盖；“O“形密封圈失效 离心管帽、垫圈、接合器使用不当;三.离心方法;1.差速离心法 （Differential centrifugation);用途： 分离大小相差悬殊的细胞和细胞结构成分。;特点： 介质密度均一； 速度由低向高，逐级离心； 操作简单； 分离纯度不高。;密度梯度离心法; 形成的溶液密度范围大 粘度低 对细胞成分损伤小 离心分离后容易去除 浓度容易测定 便宜;2.移动区带离心法 （moving-zone centrifugation);用途： 分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。 分离效果只与颗粒大小有关，与密度无关。;3.等密度梯度离心法 （isodensity centrifugation);用途： 分离密度不等的颗粒,适用于病毒、DNA、RNA、蛋白质等，效果只与颗粒密度有关，与大小无关。;细胞结构成分分离的离心技术;1938 Behrens nuclei and cytoplasm from liver cells (differential centrifugation) 1951 Brakke plant virus (density-gradient centrifugation ) De Duve lysosomes, peroxisomes Meselson, Stahl, Vinograd separating nucleic acid (equilibrium density gradient centrifugation in cesium chloride solutions ) 198