酶工程4-(9-10)结晶干燥预案.pptVIP

第九节 结晶 结晶（Crystallization）是指物质以晶体的状态从蒸汽或溶液中析出的过程。 ;一、影响酶的结晶的因素;二、常用的酶结晶法;抽提法结晶;2.有机溶剂结晶法;3. 透析平衡结晶法;4.等电点结晶法;透析平衡等电点结晶法：将浓酶液装在透析袋中,对一定pH值的缓冲溶液进行透析,使酶液的p H 值慢慢改变,逐渐接近酶的等电点,而使酶结晶析出。 气相扩散等电点结晶法：将酶液装在容器中,与装有挥发性酸或挥发性碱的容器一起置于一个较大的密闭容器中,挥发性酸(如乙酸、干冰等)或挥发性碱(如氨水等)先挥发到气相中,再慢慢溶解到酶液中,使酶液的pH值慢慢接近酶的等电点而结晶析出。 温度差结晶法：利用酶在不同的温度条件下溶解度不同的特性,通过改变温度使酶的浓度达到过饱和状态而结晶析出。 金属离子复合结晶：在酶液中加进某些金属离子, 使之与酶结合生成复合物而结晶析出。;第十节 浓缩与干燥;（一）蒸发浓缩 通过加热或者减压方法使溶液中的部分溶剂汽化蒸发, 使溶液得以浓缩的过程。（真空浓缩，使温度60oC, 防止酶失活）;（二）超滤浓缩 超滤(ultrafiltration) 浓缩以压力差为动力，将待浓缩溶液通过超滤膜，酶分子较大被滞留，水分子和小分子选择性透过，达到浓缩目的 。;（三）吸水剂 1.胶过滤浓缩 ： 利用葡聚糖凝胶Sephadex G-25或G-50等的吸水特性。将干胶直接加入样品溶液，吸水膨润后，再过滤或离心分出浓缩的酶液。 ;2.聚乙二醇浓缩： 聚乙二醇（polyethylene glycol），简称PEG 。 利用PEG的吸水特性。将PEG涂于装有酶溶液的透析袋上，置于4℃下，干PEG粉末吸收水和盐类，酶溶液即被浓缩。 一般用分子量大的PEG,如PEG 6,000和PEG 20,000，以防止PEG进入蛋白质溶液。;（四）反复冻融浓缩 利用酶溶液相对于纯水冰点较低的原理使酶分子与小分子物质分离。 （五）沉淀法 盐析法，有机溶剂法;二、干燥;干燥方法;3. 喷雾干燥：是通过喷雾装置将酶液喷成直径仅为几十微米的雾滴,分散于热气流中,水分迅速蒸发而得到粉末状的干燥酶制剂。（迅速----几秒钟） 4. 气流干燥：是在常压条件下,利用热气流直接与固体或半固体的物料接触,使物料的水分蒸发而得到干燥制品的过程。（时间长, 酶活力损失较大） 5. 吸附干燥：是在密闭的容器中用各种干燥剂吸收物料中的水分,达到干燥的目的。 吸附剂：硅胶、无水氯化钙、氧化钙、无水硫酸钙、五氧化二磷以及各种铝硅酸盐的结晶等。