高级物理化学实验讲义-液质联用探析.docVIP

PAGE  PAGE 10 高级物理化学实验讲义 实验项目名称：LCQ-Fleet液质联用仪的原理、实验技术及应用姓名: 张诗群 学号：130420123 指导教师：谢莉莉成绩评定： 评阅教师：日期： 2012 年 6 月 17 日 一、实验目的 掌握LCQ-Fleet液质联用仪基本原理。 熟悉该仪器的各部分的功能，并能进行简单的进样操作及控制软件的使用。 3.初步使用该仪器的数据处理软件，对得到的较简单实验谱图进行正确的判断及归属。 二、实验原理 1. 质谱简化流程： 2. LCQ-fleet的结构示意图。 3. 质谱相关名词 质荷比（m/z）：以原子质量单位表示的离子质量与其电荷数的比值。 基峰：在质谱图中，指定质荷比范围内强度最大的离子峰称作基峰。 总离子流谱图（TIC）：对质荷比（m/z）在一定范围内的离子电流总和进行连续检测与记录的谱图。 原子质量单位（u）：用来衡量原子或分子质量的单位，它被定义为碳12原子质量的1/12。 名称CHCl3 [M+H]+平均分子量120.38绝对分子量118.92；120.92；122.92；124.91 → 低分辨质谱精确分子量118.9217；120.9187；122.9158；124.9128 → HR-MS 离子的产生 离子源类型： Electrospray Ionization (ESI) 电喷雾电离- 大多数情况下是液态过程。 Atmospheric Pressure Photo-Ionization（APCI）大气压下化学电离-气相过程。 Atmospheric Pressure Photo-Ionization（APPI）大气压下光离子化-气相过程。 离子源作用： 去溶剂 真空过渡 离子化 去除干扰 5. 电喷雾（ESI）电离过程 6. ESI离子化特点： 1. 软电离方式，一般得到分子离子峰，如M+H+，M+Na+，M-H+; 2. 液态电离方式，流速耐受有限（＜250 ul/min）； 3. 可在常温下进行，热不稳定化合物首选； 4. 可产生多电荷离子；有利于大分子化合物（如蛋白和多肽）的分析； 5. 适用于强极性化合物； 6. 灵敏度高； 7. 大气压化学离子化（APCI）电离过程 8. 大气压化学离子化（APCI）电离过程 通过电晕放电离子化 大气压化学电离有三个过程： 1. 在高压电极作用下，氮气载气和气化的液相色谱溶剂发生反应，产生预反应离子。 2. 通过一系列复杂反应，预反应离子与溶剂分子反应形成溶剂离子H3O+和CH3OH+。 3. 溶剂离子与被分析物分子反应，在正电离模式下，形成正的分子离子；在负的电离模式下，形成负的分子离子。 9. APCI离子化的特点： 1. 软电离方式，一般得到与溶剂中相似的准分子离子峰，如+H+、-H+。不同的是由于APCI电离过程中溶剂传递电荷所以更容易产生溶剂簇离子。 2. 只能产生单电荷离子。 3. 电离过程需要高温，适合于热稳定化合物。 4. 气态电离方式，可以承受更高的流速（50-2000μL/min）、缓冲盐浓度和复杂基质。 5. 适合于更低极性的化合物（药物，农药，类固醇及含氮染料）。 6. 分子量1200 Da。 10. ESI和APCI优点对比。 ESI 1. 离子在液态产生 2. 有益于热不稳定化合物的分析 3. 有益于中等到高等极性化合物的分析 4. 有益于大分子（蛋白/多肽） APCI 1. 离子在气态产生 不利于热不稳定化合物的分析 适合小分子（类固醇，甾体化合物） 适合含有发色基团的化合物（APPI） 三、应用案例设计 四、实验步骤 1.配制好样品，等待测试。 2.打开仪器，设置好实验参数。 3.等仪器都准备就绪时，手动进样。 4.进样后，按照规定的实验方法操作计算机处理数据，当出现明显的强峰或者离子响应度足够的时候停止实验。 5.设定仪器进水速度，对仪器进行洗涤。 6.实验完成后，打印实验谱图。 7.按相应的顺序关仪器。 7.处理数据。 五、分析数据 根据所得的图谱可知，扫描结束时的离子响应度为2×104，符合要求，而扫描的质量范围在350-700之间，我们最终得到的两个较明显的峰分别为518.31和540.25。这两个峰分别为对应的化合物加上一个氢峰和钠峰后显示的峰值，所以可推断测定的化合物如下： 六、实验注意事项 样品量：固体或液体0.1~1mg，溶液浓度为10~20μmol/L，至少为ng/mL。 样品成份：请标明内容物的大致成份和相对含量。尽可能提供样品的结构式、分子量或所含官能团