农药残留检测.doc

液相色谱双检测器串联法测定农产品中 农药残留 摘要：建立了采用高效液相色谱-紫外-荧光检测器串联法测定农产品中12种农药残留的方法。采用乙腈提取, 使用氨基固相萃取小柱净化，通过液相色谱柱及变换波长等各种色谱条件优化，紫外检测器检测吡虫啉、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷，荧光检测器测定经柱后衍生的氨基甲酸酯类农药残留。12种农药在0.05~4 mg/kg范围内线性良好，平均回收率在73.0%~108%之间，RSD为0.2%~7.1%，检出限为0.001~0.03 mg/kg。方法快速、经济为农产品中农药残留检测增加一种新思路。 关键词：农药残留；农产品；高效液相色谱；紫外检测；荧光检测 因为生产的需要, 现在全世界使用的农药超过700多种。随着农药的广泛使用，各国出于保障民众消费安全和国际贸易技术壁垒需要，均制定了食品的最大残留限量(MRL)，一般小于0.01~0.05 mg/kg，为痕量或超痕量水平。由于农药的活性成分大多是小分子有机化合物，故多使用气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)和高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)及多级质谱联用技术(MSn)。其中研究应用最多的是GC-MS，适用于大部分农药残留检测[5-7]。但对于氨基甲酸酯类农药及其部分杂环类农药，因为分子量较大、极性或热不稳定性太强，不适用GC或GC-MS技术。已有研究者使用HPLC-MS同时进行多种类农药残留的快速检测研究，但质谱仪极其昂贵，不易推广；现有法规及文献分析方法大部分使用HPLC进行单一品种或单一结构类型农药的检测，一个样品要进行多次不同的提取净化分析处理，耗时长，成本高。本工作拟利用高效液相双检测器法，将高效液相色谱仪各单元有机串联，使样品经色谱柱分离后，先进入紫外检测器完成吡虫啉、多菌灵、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷等5种组分的测定，后续衍生装置将样品水解衍生化，最终由荧光检测器完成氨基甲酸酯类农药的检测。 1.1 材料与试剂 1.1.1供试材料　蔬菜、水果和新鲜食用菌样品：市售，每种质量3 kg。 1.1.2主要试剂甲醇、乙腈、二氯甲烷：色谱纯，美国Fisher公司；固相萃取氨基小柱500 mg/6 mL NH2，美国安捷伦公司；氨基甲酸酯测定专用衍生试剂包：包括0.05 mol/L氢氧化钠溶液(cat. No CB130) ，OPA 稀释溶液(cat. No CB910)，邻苯二甲醛(OPA) (cat. No 0120)，巯基乙醇(cat. No 370022000)，美国Pickering公司，天津美瑞泰克公司代理；12种农药标准溶液(1000 mg/L)：涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、3-羟基克百威、涕灭威、克百威、甲萘威、多菌灵、吡虫啉、除虫脲、灭幼脲、辛硫磷，天津东方绿色技术发展公司。其他试剂均为分析纯，所有用水均为超纯水。 1.2 仪器与设备 Waters 2695高效液相色谱仪：配有可变波长2487紫外检测器，串联柱后衍生装置、2475 荧光检测器及Empower数据处理系统，美国Waters公司； MilliQ 纯水发生器：美国Bedford公司；R215 旋转蒸发仪：瑞士Buchi公司；T18 高速均质仪：德国IKA 公司。 1.3 实验条件 1.3.1色谱条件 色谱柱：Eclipse XDB-C8色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；柱箱温度 40 ℃；梯度洗脱条件：流动相A为甲醇，流动相B为水，A相从初始的20%经2 min升到25%，在2～10 min，A升到40%，在10～20 min，A升到60%，至25 min达到90%并保持10 min，流速为1.0 mL/min；进样量10 μL；紫外检测器：波长以275 nm起始，13 min换成245 nm，14 min换成275 nm；荧光检测器：激发波长330 nm，发射波长465 nm；柱后衍生条件：衍生池温度100 ℃，0.05 mol/L氢氧化钠溶液流速0.3 mL/min，OPA试剂流速0.3 mL/min。 1.3.2样品制备　通过四分法取不少于1000 g样品，将可食部分切碎，充分混匀放入食物调理机捣碎，放入分装容器中备用，如不能马上处理，需放-20 ℃冰箱保存。 1.3.3提取和净化　水果和蔬菜：参照文献方法实施，作了部分改动，将甲醇+二氯甲烷洗脱液比例调为(10+95)，当洗脱液蒸发至近干后，先用3.5 mL甲醇溶解，再加入1.5 mL水混匀，用0.2 μm的滤膜过滤，成上机待测液。新鲜食用菌：准确称取25.0 g 样品于200 mL高型烧杯中，加入50 mL乙腈，高速匀浆2 min，加入8 g氯化钠继续匀浆0.5 min，在室温下静置20 min，待胶状固体沉淀聚合后，倾倒液体过滤，后准确吸取10